分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。功能研究型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù),結(jié)合了強(qiáng)大的CRISPR基因編輯技術(shù),從而可以深度挖掘基因表達(dá)調(diào)控與細(xì)胞功能以及命運(yùn)決定之間的因果關(guān)系。在未來(lái),為了更系統(tǒng)地研究多層組學(xué)之間的互動(dòng)關(guān)系對(duì)細(xì)胞命運(yùn)的影響,一方面,單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的策略會(huì)繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個(gè)組學(xué)的三組學(xué)甚至四組學(xué)方向發(fā)展.另一方面,單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)會(huì)轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測(cè)序分析和功能驗(yàn)證同時(shí)進(jìn)行的方法,這種探究因果關(guān)系的策略對(duì)于揭示發(fā)育和疾病發(fā)展中的關(guān)鍵因子和分子網(wǎng)絡(luò)模塊十分重要。功能研究型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)結(jié)合了CRISPR基因編輯技術(shù), 深度挖掘基因表達(dá)調(diào)控與細(xì)胞功能。廈門烈冰單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時(shí)間和空間順序發(fā)生，因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時(shí)間特異性和空間特異性。時(shí)間特異性可以通過(guò)收集不同時(shí)間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序來(lái)分析。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-Seq）在單細(xì)胞懸液制備的過(guò)程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu)，無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個(gè)問(wèn)題，其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息，在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性。無(wú)錫單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持利用單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)能夠更有效地研究細(xì) 胞在特定時(shí)空狀態(tài)下各組學(xué)間的復(fù)雜聯(lián)系。
單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)再樣本細(xì)胞上機(jī)分選簽，需要對(duì)細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活性進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，這對(duì)SingleCell分選標(biāo)記、建庫(kù)、下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高，將會(huì)影響建庫(kù)的成功率；計(jì)數(shù)偏低，則會(huì)顯著提高雙細(xì)胞的比例；而細(xì)胞活率過(guò)低，就會(huì)使測(cè)序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細(xì)胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過(guò)程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細(xì)胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細(xì)胞分選平臺(tái)配套了專門定制的電動(dòng)移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來(lái)對(duì)應(yīng)各種不同的操作。通過(guò)已經(jīng)設(shè)定的程序來(lái)控制液體的流速，大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來(lái)的差異，保證實(shí)驗(yàn)操作的一致性。
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中，并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)過(guò)濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過(guò)分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn)，當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候，結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過(guò)濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn)；否則，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量非常接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。單細(xì)胞測(cè)序手段有力地解決了組織內(nèi)高度異質(zhì)性對(duì)于低豐度信號(hào)影響的問(wèn)題。
隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（scRNA-Seq）的蓬勃發(fā)展，其在在胚胎發(fā)育，腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性，免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多方面屢建奇功，但是由于細(xì)胞形態(tài)的不同和單細(xì)胞制備中細(xì)胞敏感性的差異等因素影響，scRNA-Seq在數(shù)據(jù)分析時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞類型占比失真，個(gè)別細(xì)胞類型丟失等情況。為了克服單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的局限性，單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（snRNA-Seq）應(yīng)運(yùn)而生，snRNA-Seq可利用凍存組織直接制備單細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，不僅克服了細(xì)胞形態(tài)差異致使的細(xì)胞捕獲差異，還克服了單細(xì)胞測(cè)序必須使用新鮮樣本的多個(gè)局限性。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)遍地開(kāi)花，烈冰服務(wù)讓您的生物醫(yī)學(xué)研究如虎添翼。南京烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序服務(wù)
單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)(single-cell multimodal omics) 是指在同一細(xì)胞中同時(shí)測(cè)量多種組學(xué)數(shù)據(jù)的前沿技術(shù)。廈門烈冰單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
對(duì)于單細(xì)胞測(cè)序而言，常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開(kāi)展后續(xù)各項(xiàng)分析，并且數(shù)據(jù)分析時(shí)以細(xì)胞聚類（cell cluster）為討論對(duì)象，而不是像常規(guī)Bulk測(cè)序一樣以組別為分析對(duì)象，因此單細(xì)胞測(cè)序項(xiàng)目對(duì)樣本入組要求沒(méi)有Bulk測(cè)序那樣嚴(yán)格，但是單細(xì)胞測(cè)序，特別是目的為圖譜研究時(shí)，需要通過(guò)提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此，單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)時(shí)首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來(lái)源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫(kù)、測(cè)序，以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù)，單個(gè)樣本分別捕獲細(xì)胞時(shí)，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。廈門烈冰單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
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