冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理，使細(xì)胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，從而獲取基因表達(dá)信息?？傮w來說，空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機(jī)測(cè)序，而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單：組織凍存與OCT包埋。分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。合肥single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
烈冰生物已空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序服務(wù)提供從一個(gè)組織切片樣本中獲取包括空間信息在內(nèi)的全部轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，從而可以區(qū)分和定位功能基因在特定組織區(qū)域內(nèi)的活躍表達(dá)。其可以檢測(cè)組織樣本中的所有基因活動(dòng)，并繪制活動(dòng)發(fā)生的位置，這將有助于科學(xué)家更好地構(gòu)建生物圖譜，并進(jìn)一步理解疾病和生物學(xué)過程。目前，空間轉(zhuǎn)錄組主要應(yīng)用于多種疾病、免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理學(xué)等研究領(lǐng)域。烈冰生物具有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)、豐富的切片經(jīng)驗(yàn)，配置了國際主流的儀器設(shè)備，實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)針對(duì)不同組織類型優(yōu)化完善實(shí)驗(yàn)方案，并制定了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室SOP流程，保證空間轉(zhuǎn)錄組切片的質(zhì)量，全優(yōu)保障測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量。成都single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視化單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)基于單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)和高通量組學(xué)方法發(fā)展而來,能在單細(xì)胞分辨率下同時(shí)整合多種組學(xué)信息。
二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測(cè)序”（sequencingbysynthesis）和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)（massiveparallelanalysis,MPS），使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升，烈冰生物斥巨資購置的Novaseq6000測(cè)序儀的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步：樣品文庫構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長(zhǎng)限制，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3和5端接上3種序列：1）Index，用于區(qū)分樣品來源；2）Adapter，用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn)；3）Primerbindingsite，用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)。
reads數(shù)、基因表達(dá)量及細(xì)胞數(shù)量判定過程中：以捕獲5000個(gè)細(xì)胞、100G的測(cè)序量為標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)細(xì)胞的reads數(shù)大約在50k左右；每個(gè)細(xì)胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細(xì)胞類型，例如成熟的B，T，粒細(xì)胞數(shù)量較多的組織中，由于該類型細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)普遍較少，導(dǎo)致基因中位數(shù)下降。而某一疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細(xì)胞等，他們的基因表達(dá)數(shù)較高，甚至可以超過1萬，這就導(dǎo)致該類樣本基因中位數(shù)非常高。因此，我們對(duì)細(xì)胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認(rèn)時(shí)，需要考察實(shí)際組織的細(xì)胞組成。單細(xì)胞多組學(xué)可從整體層面快速有效地探尋疾病發(fā)生、發(fā)展的根本原因或藥物作用靶點(diǎn)等信息。
單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測(cè)技術(shù)的完善,但即使在單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細(xì)胞水平協(xié)同檢測(cè)多個(gè)不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學(xué)都有不同的特性和測(cè)量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細(xì)胞水平對(duì)多種組學(xué)方法進(jìn)行整合和應(yīng)用時(shí),需要在策略上做出改進(jìn),以保證各組學(xué)間的上游建庫以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時(shí)也要明確技術(shù)的局限性及其對(duì)研究結(jié)果的潛在影響。單細(xì)胞測(cè)序手段有力地解決了組織內(nèi)高度異質(zhì)性對(duì)于低豐度信號(hào)影響的問題。烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持
烈冰測(cè)序數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對(duì)不同平臺(tái)的數(shù)據(jù)，制定多套流程。合肥single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
多樣本數(shù)據(jù)合并：FractionofReadsKept：合并樣本時(shí)，各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計(jì)算出來的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大，需要進(jìn)行Downsample處理，以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測(cè)序深度標(biāo)化到同一水平，從而避免因測(cè)序深度差異導(dǎo)致的基因檢測(cè)數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù)，深入解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果，深入挖掘其背后的生物學(xué)意義；從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究，加速科研進(jìn)程！合肥single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
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