BDRhapsody單細胞分選系統(tǒng)集成了熒光顯微成像系統(tǒng)，可以對不同熒光標(biāo)記的細胞進行檢測并計數(shù)。在進行質(zhì)量評估之前，首先要將細胞的培養(yǎng)體系更換成上機所需的Buffer。在這個過程中，需要進行多次離心、重懸操作，烈冰Novelbio單細胞實驗團隊推薦采用水平轉(zhuǎn)子離心機來進行這步操作。這種離心機可以有效減少細胞在多次更換Buffer過程中的損失，尤其是對于細胞量較少的樣本來說，顯得非常有必要。更換完Buffer之后，還需要將細胞進行過篩操作，去除較大的細胞團，獲得較為純凈的單細胞懸液。單細胞技術(shù)從 2009 年發(fā)展到現(xiàn)在，研究范圍不再局限于轉(zhuǎn)錄組，擴展到了基因組、免疫組、蛋白組等多組學(xué)水平。武漢高通量測序單細胞多組學(xué)測序
FluidigmC1平臺基于富魯達（Fluidigm®）的微流控技術(shù)應(yīng)用于單細胞測序（SingleCellRNASequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化中，該技術(shù)大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細胞，進行各類的Single-Cell測序建庫。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認的是，現(xiàn)在很多非RNA類SingleCell測序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如SingleCellDNA-Seq，SingleCellATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進行單細胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10XGenomics、BD或者其他企業(yè)推出有效的SingleDNA測序技術(shù)之前，C1仍然會是市場上的重要組成部分。南京高通量測序單細胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)烈冰智造PanoCell單細胞捕獲，媲美國際主流的單細胞平臺。
單細胞多組學(xué)測序技術(shù)是在單細胞分辨率下精確分析細胞異質(zhì)性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新技術(shù)，提供了全新的視角來分析細胞的分化路徑、細胞間的交互調(diào)控和細胞亞群的分離現(xiàn)象。轉(zhuǎn)錄組、表觀基因組、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)的差異賦予了組織內(nèi)同樣基因組背景下的單個細胞的功能特異性。單個細胞的組學(xué)變化決定了組織的功能狀態(tài)，因此，闡明組織的細胞異質(zhì)性是破譯生理功能和病理演變的關(guān)鍵。然而，以bulkＲＮＡ測序等為**的傳統(tǒng)方法掩蓋了細胞的異質(zhì)性，細胞組學(xué)變化的平均水平。近１０年來，單細胞組學(xué)技術(shù)應(yīng)運而生，實現(xiàn)了在單細胞分辨率下研究分子的變化規(guī)律。
單細胞測序?qū)嶒炘贅颖炯毎蠙C分選簽，需要對細胞數(shù)量、細胞活性進行準(zhǔn)確判斷，這對SingleCell分選標(biāo)記、建庫、下機數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細胞計數(shù)偏高，將會影響建庫的成功率；計數(shù)偏低，則會顯著提高雙細胞的比例；而細胞活率過低，就會使測序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來對應(yīng)各種不同的操作。通過已經(jīng)設(shè)定的程序來控制液體的流速，大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來的差異，保證實驗操作的一致性。烈冰測序數(shù)據(jù)分析平臺，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對不同平臺的數(shù)據(jù)，制定多套流程。
空間轉(zhuǎn)錄組測序與單細胞測序的結(jié)果不同，這里存在一個概念叫做NumberofSpotsundertissue，即，空間轉(zhuǎn)錄組片子上組織覆蓋的有效的spot位點。這個有效Spot的篩選標(biāo)準(zhǔn)是有UMI以及有序列表達。那么這個時候，貼片的質(zhì)量就成為了制約空間轉(zhuǎn)錄組有效區(qū)域的要點了。如果組織沒有很好地覆蓋到空轉(zhuǎn)片上，那么容易出現(xiàn)雖然有HE染色有組織片子，但是沒有基因表達，即無有效Spot位點。同樣的，另一個就是組織切片的大小，也就是說組織切片在整個玻片的覆蓋面積越小，分析的有效區(qū)域就越少。這兩者基本上決定了整個空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果的基礎(chǔ)質(zhì)量。單細胞組學(xué)技術(shù)方法的不斷 發(fā)展和改進, 為單細胞層級的多組學(xué)整合分析奠定了 基礎(chǔ)。廈門烈冰科技單細胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視化
烈冰專精單細胞多組學(xué)測序領(lǐng)域。武漢高通量測序單細胞多組學(xué)測序
未來,單細胞多組學(xué)測序技術(shù)的發(fā)展,一方面將集中在對現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化和新方法的開發(fā).現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化不僅包括建庫手段、測序技術(shù)和算法工具等方面,還包括優(yōu)化實驗設(shè)計、自動化實驗流程以及提升實驗效率.為了更好地檢測到各種大分子的特征,研究者可以考慮從生物、化學(xué)和物理等多學(xué)科中尋找解決方案.此外,新的計算方法和分析工具能幫助研究者越過一些實驗限制,發(fā)現(xiàn)更多新奇的生物過程.例如,擬時序分析(pseudotimetrajectory)將有助于人們理解早期胚胎發(fā)育的細胞分化軌跡.新方法則可以更多地關(guān)注目前未能檢測到的一些重要的基因表達調(diào)控層面,如DNA三維結(jié)構(gòu)、非編碼RNA和胞內(nèi)蛋白等.另一方面,目前的單細胞多組學(xué)測序技術(shù)發(fā)展勢頭強勁,研究者不斷研發(fā)并豐富著單細胞測序工具箱,各種組學(xué)方法百家爭鳴.未來,研究者需要從眾多相似的方法中篩選出一些穩(wěn)定、通用、成本低、可商業(yè)化的方法,并進一步擴大其實際應(yīng)用范圍。武漢高通量測序單細胞多組學(xué)測序
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