冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進行透化處理，使細胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測序文庫進行上機測序，從而獲取基因表達信息?？傮w來說，空間轉(zhuǎn)錄組的實驗流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機測序，而需要客戶進行樣本準備的步驟相對簡單：組織凍存與OCT包埋。在單細胞轉(zhuǎn)錄組領域，將轉(zhuǎn)錄組與蛋白質(zhì)結(jié)合的代表性例子只有單細 胞RＮＡ測序方法。西安單細胞多組學技術支持
單細胞測序技術的不斷發(fā)展解決了以往群體細胞組學分析面臨的兩個瓶頸:一是大量細胞的混合測序會掩蓋細胞間的異質(zhì)性;二是傳統(tǒng)的測序技術需要大量的細胞作為起始,細胞數(shù)目稀有的樣品則難以研究.利用單細胞測序方法不僅能夠揭示組織中的細胞類型和稀有亞群、細胞狀態(tài)和命運的變化,還可以研究細胞數(shù)稀有的珍貴樣品,從而幫助人們理解發(fā)育、衰老和疾病發(fā)展的機制。隨著單細胞轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀遺傳組、蛋白組等各組學測序技術的快速發(fā)展,研究者開始將它們相互組合,使得單個細胞或同類細胞的多個組學數(shù)據(jù)能夠聯(lián)合分析.因此,利用單細胞多組學技術能夠更有效地研究細胞在特定時空狀態(tài)下各組學間的復雜聯(lián)系,從而揭示細胞狀態(tài)和命運調(diào)控的分子機制。蘇州single cell RNA單細胞多組學測序服務單細胞多組學突破了以往單細胞檢測的單一性,可更多樣化。
二代測序技術在測序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測序”（sequencingbysynthesis）和大規(guī)模平行測序技術（massiveparallelanalysis,MPS），使測序通量和讀取速度得到極大提升，烈冰生物斥巨資購置的Novaseq6000測序儀的測序原理可以簡化為四步：樣品文庫構(gòu)建、簇生成、測序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長限制，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3和5端接上3種序列：1）Index，用于區(qū)分樣品來源；2）Adapter，用于結(jié)合測序通道上的位點；3）Primerbindingsite，用于結(jié)合PCR引物啟動擴增反應。
單細胞多組學技術優(yōu)勢：1. 構(gòu)建蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，大幅度提高蛋白質(zhì)鑒定數(shù)量；2. 不同層面表達水平分析，構(gòu)建表達“全景圖”；3. 多組學交叉驗證：深層次挖掘其中調(diào)控機制；4. 對基因突變信息在蛋白水平上進行驗證；5.精細醫(yī)療：實現(xiàn)genomics到protegenomics的轉(zhuǎn)變。生物領域各個研究方面，1. 農(nóng)林領域：抗逆脅迫機制，生長發(fā)育機制，育種保護研究等；2. 畜牧業(yè)：肉類及乳品質(zhì)研究，致病機理研究等；3. 基礎醫(yī)學、臨床診斷：生物標志物，疾病機理機制，疾病分型等；4. 生物醫(yī)藥：藥物作用機理，藥效評價，藥物開發(fā)等；5. 微生物領域：致病機理，耐藥機制，病原體-宿主相互作用研究等；6. 海洋水產(chǎn)：漁業(yè)資源，海水養(yǎng)殖，漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等；7. 生物能源、環(huán)境科學領域：發(fā)酵過程優(yōu)化，生物燃料生產(chǎn)，環(huán)境危定風險評估研究等；8.食品營養(yǎng)：食品儲藏及加工條件優(yōu)化，食品組分及品質(zhì)鑒定，功能性食品開發(fā)，食品安全監(jiān)檢測等。為了能深入分析和理解細胞狀態(tài)和命運決定的機制, 將單細胞各組學技術結(jié)合在一起的單細胞多組學技術產(chǎn)生。
機體為響應各種應激，其細胞會從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”；當細胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時，往往會經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組，導致一些基因被“沉默”，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態(tài)細胞進行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細胞狀態(tài)。擬時序分析，即根據(jù)不同細胞亞群基因表達量隨時間的變化情況，構(gòu)建細胞譜系發(fā)育，但這里的時間并不是真時間，而是一個虛擬的時間，是指的細胞與細胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中，也會存在多種不同的細胞形態(tài)。因此，不論測定了多少樣本，我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細胞轉(zhuǎn)化和變化進行描述。未來，單細胞多組學測序技術的策略會繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個組學的三組學甚至四組學方向發(fā)展。濟南scRNA單細胞多組學測序服務
單細胞測序技術提供了單個細胞水平下的科學研究視角。西安單細胞多組學技術支持
烈冰生物生信分析團隊緊追國際前沿、整合添加多項國際期刊認可的空轉(zhuǎn)分析工具，構(gòu)建一套完整的數(shù)據(jù)分析流程；精心研發(fā)空轉(zhuǎn)結(jié)果瀏覽器，可同步展示空間轉(zhuǎn)錄組與單細胞測序分析結(jié)果，詳細深入地解析空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。完成從Rawdata（原始數(shù)據(jù)）到Spot-Gene的具有定位信息的表達矩陣的過程后，就進入了空轉(zhuǎn)的第二步，去進行Spot的Cluster的過程，熟悉單細胞測序的研究者知道，Cluster在單細胞測序中往往表示為細胞的類型，也就是說能聚在一起采用算法分為一個群體細胞是一個Celltype（當然分情況也會有不同）。而在空轉(zhuǎn)中，也正是由于前面提到了細胞的非單一性，導致了這里的分群并不是單純的同一細胞類型，而應該認為是具有相同細胞組成的點陣區(qū)域，或者說是近似的組織結(jié)構(gòu)區(qū)域。西安單細胞多組學技術支持
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