二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測(cè)序”（sequencingbysynthesis）和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)（massiveparallelanalysis,MPS），使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升，烈冰生物斥巨資購(gòu)置的Novaseq6000測(cè)序儀的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步：樣品文庫(kù)構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長(zhǎng)限制，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3和5端接上3種序列：1）Index，用于區(qū)分樣品來(lái)源；2）Adapter，用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn)；3）Primerbindingsite，用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)。分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。廣州高通量測(cè)序單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
對(duì)于單細(xì)胞測(cè)序而言，常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開(kāi)展后續(xù)各項(xiàng)分析，并且數(shù)據(jù)分析時(shí)以細(xì)胞聚類（cell cluster）為討論對(duì)象，而不是像常規(guī)Bulk測(cè)序一樣以組別為分析對(duì)象，因此單細(xì)胞測(cè)序項(xiàng)目對(duì)樣本入組要求沒(méi)有Bulk測(cè)序那樣嚴(yán)格，但是單細(xì)胞測(cè)序，特別是目的為圖譜研究時(shí)，需要通過(guò)提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此，單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)時(shí)首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來(lái)源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫(kù)、測(cè)序，以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù)，單個(gè)樣本分別捕獲細(xì)胞時(shí)，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。溫州高通量測(cè)序單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序烈冰科技已建立了基于單細(xì)胞測(cè)序的高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)多平臺(tái)。
FluidigmC1平臺(tái)基于富魯達(dá)（Fluidigm®）的微流控技術(shù)應(yīng)用于單細(xì)胞測(cè)序（SingleCellRNASequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化中，該技術(shù)大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類的Single-Cell測(cè)序建庫(kù)。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是，現(xiàn)在很多非RNA類SingleCell測(cè)序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如SingleCellDNA-Seq，SingleCellATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫(kù)。所以可以說(shuō)，至少在10XGenomics、BD或者其他企業(yè)推出有效的SingleDNA測(cè)序技術(shù)之前，C1仍然會(huì)是市場(chǎng)上的重要組成部分。
基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴(kuò)增成千上萬(wàn)倍，保證過(guò)程中足夠的測(cè)序深度。測(cè)序時(shí)使用特殊標(biāo)記的dNTP：1）堿基上通過(guò)敏感鍵修飾上不同的熒光基團(tuán)，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團(tuán)封閉，保證一次循環(huán)只上一個(gè)dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時(shí)，會(huì)通過(guò)高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團(tuán)和疊氮基團(tuán)，開(kāi)啟下一循環(huán)。通過(guò)分析讀取同一位點(diǎn)的熒光，實(shí)時(shí)獲取模版鏈的堿基序列。由于過(guò)程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會(huì)出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長(zhǎng)只能限制在200bp左右。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)是在單細(xì)胞分辨率下精確分析細(xì)胞異質(zhì)性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新技術(shù)。
細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時(shí)間和空間順序發(fā)生，因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時(shí)間特異性和空間特異性。時(shí)間特異性可以通過(guò)收集不同時(shí)間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序來(lái)分析。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-Seq）在單細(xì)胞懸液制備的過(guò)程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu)，無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個(gè)問(wèn)題，其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息，在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)整合了單細(xì)胞各個(gè)組學(xué)特征, 提供了揭示細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其互動(dòng)關(guān)系的機(jī)會(huì)。成都scRNA單細(xì)胞多組學(xué)服務(wù)機(jī)構(gòu)
隨著組學(xué)新技術(shù)的不斷涌現(xiàn)，高通量的方向發(fā)展，通過(guò)對(duì)多組學(xué)數(shù)據(jù)的整合分析，已成為科研究新方向。廣州高通量測(cè)序單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)集成了熒光顯微成像系統(tǒng)，可以對(duì)不同熒光標(biāo)記的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)并計(jì)數(shù)。在進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估之前，首先要將細(xì)胞的培養(yǎng)體系更換成上機(jī)所需的Buffer。在這個(gè)過(guò)程中，需要進(jìn)行多次離心、重懸操作，烈冰Novelbio單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)推薦采用水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)來(lái)進(jìn)行這步操作。這種離心機(jī)可以有效減少細(xì)胞在多次更換Buffer過(guò)程中的損失，尤其是對(duì)于細(xì)胞量較少的樣本來(lái)說(shuō)，顯得非常有必要。更換完Buffer之后，還需要將細(xì)胞進(jìn)行過(guò)篩操作，去除較大的細(xì)胞團(tuán)，獲得較為純凈的單細(xì)胞懸液。廣州高通量測(cè)序單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司總部位于江月路999號(hào)奇亞特中心22幢，是一家生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計(jì)算機(jī)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢，市場(chǎng)營(yíng)銷策劃，市場(chǎng)信息咨詢與調(diào)查（不得從事社會(huì)調(diào)查、社會(huì)調(diào)研、民意調(diào)查、民意測(cè)驗(yàn)），從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)，計(jì)算機(jī)、軟件及耗材（除?？兀浖_(kāi)發(fā)【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】的公司。烈冰生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì)，以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供單細(xì)胞測(cè)序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái)，空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序。烈冰生物不斷開(kāi)拓創(chuàng)新，追求出色，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺(tái)，以應(yīng)用為重點(diǎn)，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值，提供更優(yōu)服務(wù)。烈冰生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康市場(chǎng)，以敏銳的市場(chǎng)洞察力，實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。