重慶高通量測(cè)序空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序價(jià)格

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-08-15

空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個(gè)階段:1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分;2.Spot點(diǎn)陣的分群與定義;3.Spot分群的功能與生物學(xué)價(jià)值。每一個(gè)部分都不可或缺,其結(jié)果都對(duì)后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的,都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計(jì)。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細(xì)胞的原始數(shù)據(jù)過(guò)濾策略即可,左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負(fù)荷。隨后,采用10X官方的Spatialranger的策略進(jìn)行后續(xù)分析,解析出位于空間位置中的有效的Spot表達(dá)矩陣。國(guó)產(chǎn)化PanoCell空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序平臺(tái),提供高性價(jià)比服務(wù)方案。重慶高通量測(cè)序空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序價(jià)格

空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在病理學(xué)中,通過(guò)添加基因表達(dá)維度,得出形態(tài)學(xué)結(jié)論,通過(guò)觀察基因表達(dá)區(qū)域,了解可能發(fā)生假陰性/假陽(yáng)性的位置; 在免疫學(xué),研究免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、不同區(qū)域的免疫細(xì)胞中的基因表達(dá)特征;免疫群體擴(kuò)散、不同類型免疫細(xì)胞的空間位置解析; 在神經(jīng)科學(xué),研究大腦皮層層狀組織解析,揭示大腦皮層的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系,正常vs.疾病大腦結(jié)構(gòu)特征分析與疾病相關(guān)的基因表達(dá)于特定的大腦皮層; 在發(fā)育生物學(xué),通過(guò)解析每個(gè)發(fā)育階段不同解剖區(qū)域特有的基因表達(dá)特征,解析組織中與形態(tài)形成相關(guān)基因;豐富基因表達(dá)的空間注釋信息,創(chuàng)建組織發(fā)育的空間細(xì)胞圖譜。西安空間轉(zhuǎn)錄組多組學(xué)測(cè)序空間轉(zhuǎn)錄組可展示組織切片中不同區(qū)域的基因表達(dá)情況,揭示精細(xì)病理區(qū)域的信號(hào)通路。

為同時(shí)獲得空間表達(dá)和組織學(xué)背景信息,該方案首先將FFPE組織切片置于Visium基因芯片上進(jìn)行組織學(xué)染色和成像,然后利用切片下方Visium基因芯片上的探針進(jìn)行表達(dá)定量。由于FFPE樣本通常存在RNA高度降解的問(wèn)題,針對(duì)FFPE樣本的Visium空間基因表達(dá)解決方案無(wú)法像新鮮凍存組織樣本一樣利用完整mRNA具有的poly(dA)序列進(jìn)行mRNA捕獲。該方案采用針對(duì)編碼基因的成對(duì)RNA模板連接探針(RTL)與mRNA雜交。左側(cè)探針(LHS)具有部分Read 2序列,右側(cè)探針(RHS)具有合成的poly(A)序列。左右探針與mRNA雜交后彼此連接,而mRNA被RNase降解。組織透化后,被連接的成對(duì)探針與芯片上包含空間Barcode、UMI和poly(dT)序列的引物序列捕獲,并且空間Barcode和UMI序列被延伸到成對(duì)探針序列上。攜帶空間Barcode的探針序列用于進(jìn)行測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建和測(cè)序。測(cè)序序列上的空間Barcode用于將測(cè)序序列定位到組織切片圖像上,UMI用于基因表達(dá)定量。

基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴(kuò)增成千上萬(wàn)倍,保證過(guò)程中足夠的測(cè)序深度。測(cè)序時(shí)使用特殊標(biāo)記的dNTP:1)堿基上通過(guò)敏感鍵修飾上不同的熒光基團(tuán),用于區(qū)分ATCG;2)3端使用疊氮基團(tuán)封閉,保證一次循環(huán)只上一個(gè)dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時(shí),會(huì)通過(guò)高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像,再通入試劑除去熒光基團(tuán)和疊氮基團(tuán),開啟下一循環(huán)。通過(guò)分析讀取同一位點(diǎn)的熒光,實(shí)時(shí)獲取模版鏈的堿基序列。由于過(guò)程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控,隨著循環(huán)數(shù)的增大會(huì)出現(xiàn)不同步的情況,因此Illumina的讀長(zhǎng)只能限制在200bp左右。強(qiáng)勢(shì)發(fā)文!烈冰空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序助力揭示愈傷組織能再生的機(jī)制。

當(dāng)組織冷凍切片附在帶有spatialbarcode的空間轉(zhuǎn)錄組芯片上時(shí),通過(guò)透化處理,細(xì)胞內(nèi)的mRNA釋放出來(lái),從而被芯片上帶有oligo-dT的探針捕獲。被捕獲的mRNA開始逆轉(zhuǎn)錄,得到的cDNA中包含了spatialbarcode序列。通過(guò)上機(jī)測(cè)序,可以將每個(gè)mRNA轉(zhuǎn)錄的序列映射回組織切片中的映射回組織切片中的原始位置。Visium空間轉(zhuǎn)錄組的重點(diǎn)在于芯片部分:正式文庫(kù)構(gòu)建的芯片上有4個(gè)捕獲區(qū)域(6.5mmX6.5mm,可以檢測(cè)4個(gè)樣本)每個(gè)捕獲區(qū)域含有約5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcodedspots)每個(gè)spot直徑55μm,每個(gè)spot能捕獲1-10個(gè)細(xì)胞spot與spot中心點(diǎn)之間的距離為100μm每個(gè)spot含有上百萬(wàn)個(gè)可以與mRNA結(jié)合的捕獲探針,每個(gè)探針上都帶有獨(dú)特的spatialbarcodes,用以標(biāo)記捕獲的mRNA的空間位置。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)遍地開花,烈冰服務(wù)讓您的生物醫(yī)學(xué)研究如虎添翼。武漢高通量測(cè)序空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析

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RNA測(cè)序(RNA-seq)是轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的重要工具,也是生命科學(xué)領(lǐng)域常用的技術(shù)之一。相比于傳統(tǒng)通路研究低維度、低通量的局限性,轉(zhuǎn)錄組學(xué)有以下優(yōu)勢(shì):1)能夠動(dòng)態(tài)考察細(xì)胞基因組的表達(dá),多維度地反映差異變化;2)可用于研究占RNA絕大部分的非編碼RNA,研究其結(jié)構(gòu)以及在細(xì)胞生命活動(dòng)中的重要調(diào)控作用;3)與蛋白組學(xué)研究相互補(bǔ)充,多角度呈現(xiàn)細(xì)胞水平的變化信息。作為轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的技術(shù)基礎(chǔ),RNA測(cè)序技術(shù)也在不斷地更新迭代,現(xiàn)如今更大通量、更深精度的測(cè)序?yàn)楸姸嗫蒲泻歪t(yī)學(xué)工作者提供了豐富的工具和探索真理的手段。重慶高通量測(cè)序空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序價(jià)格

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