單細胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個共同過程，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進行分析。不過，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫，從而測定整個轉(zhuǎn)錄組的基因表達。RT-qPCR則是從cDNA中擴增特定靶點，并通過熒光測定表達水平。RT-qPCR限于已知靶點，而RNA-seq可實現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達分析。然而，這兩者只能提供細胞群體內(nèi)基因表達的平均情況。單細胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細胞分離到微孔或單個微反應(yīng)容器中。然后用細胞特異性的條形碼標記RNA，確保來自每個細胞的cDNA可以追溯到起源細胞。與RNA-seq相似，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫，從而能夠?qū)γ總€細胞的整個轉(zhuǎn)錄組進行基因表達測定。從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析，只要您需要，烈冰提供全流程的無憂服務(wù)。蘇州高通量測序單細胞測序多組學(xué)測序
細胞中基因的表達是嚴格按照時間和空間順序發(fā)生，因此細胞類型和基因表達具有時間特異性和空間特異性。時間特異性可以通過收集不同時間點的樣本進行單細胞轉(zhuǎn)錄組測序來分析。但是單細胞轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-Seq）在單細胞懸液制備的過程中破壞了細胞的空間結(jié)構(gòu)，無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個問題，其以點陣形式記錄組織切片細胞的空間信息，在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，獲得細胞/基因的空間表達特異性。西安10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。
現(xiàn)有的單細胞測序技術(shù)陣營在幾個主要領(lǐng)域存在差別。一個是分隔單個細胞以在其中進行微反應(yīng)的物理平臺。在這個空間，單個細胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標記或添加索引，以便下游識別?，F(xiàn)有技術(shù)的另一個主要區(qū)別是如何添加索引，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10XGenomics單細胞測序平臺采用動態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，其中一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligodT抓住mRNA構(gòu)建文庫。
針對單細胞測序的細胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對細胞數(shù)量、基因表達量、測序質(zhì)量進行整體描述。過濾標準：由于細胞破碎后游離RNA會釋放到環(huán)境或孔中，并且測序中也會存在一些死細胞，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此，我們需要設(shè)定一定的標準來過濾掉假細胞或死細胞。以10×Genomics為例，細胞數(shù)量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點，當(dāng)存在多個斜率拐點的時候，結(jié)合預(yù)期UMI=500時的細胞數(shù)量進行過濾。當(dāng)斜率拐點低于UMI=500的時候，選擇UMI=500作為細胞的判斷的標準；否則，選擇和預(yù)期細胞數(shù)量接近的拐點作為細胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。過去的十年，我們是知識的承載者；現(xiàn)在，我們在努力構(gòu)建醫(yī)學(xué)的大數(shù)據(jù)時代；未來我們將重新定義知識形態(tài)！
烈冰與國內(nèi)高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作，服務(wù)于600+臨床與研究機構(gòu)，1000+客戶和5000+重要科研項目，助力并聯(lián)合發(fā)表300+篇CNS等國際學(xué)術(shù)期刊（不完全統(tǒng)計），在單細胞領(lǐng)域，烈冰助力用戶發(fā)表單細胞文獻30+篇，總IF＞300+，IF＞10+以上文章占比65%以上，包含Immunity、NatureCellBiology、NaturePlants、AdvancedScience等生物領(lǐng)域國際主流學(xué)術(shù)期刊，已發(fā)表文章研究領(lǐng)域涵蓋包括COVID-19研究、疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移機制，免疫研究、腦神經(jīng)、白血病、胚胎發(fā)育、糖尿病、退行性疾病和植物領(lǐng)域研究等。截至2021年10月，烈冰助力發(fā)表單細胞測序文章近20篇。溫州上海烈冰單細胞測序
個性化制定測序項目方面，滿足從檢測基因到蛋白的多組學(xué)測序要求。蘇州高通量測序單細胞測序多組學(xué)測序
基因和基因產(chǎn)物并不是單獨運作的，而是參與了相互關(guān)聯(lián)的復(fù)雜通路、網(wǎng)絡(luò)和分子系統(tǒng)，這些合在一起實現(xiàn)了細胞、組織和生物體的運作。定義這些系統(tǒng)并確定它們的特征和相互作用，對于了解生物系統(tǒng)如何運作至關(guān)重要。”為了推動科學(xué)發(fā)現(xiàn)，科學(xué)家們需要各種能夠幫助多方位了解其樣本的潛在生物復(fù)雜性的研究工具。對于越來越多的研究人員來說，單細胞RNA測序和單細胞多組學(xué)——即在單細胞分辨率下對基因表達及其他基于DNA、RNA或蛋白質(zhì)的分析物進行定量分析的基因組方法——在幫助解決他們面臨的生物學(xué)問題上已證實是行之有效的。蘇州高通量測序單細胞測序多組學(xué)測序
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