關于10X Genomics單細胞平臺的樣本類型和樣本制備 :10X平臺在上機前需要注意細胞消化后的細胞團塊,獲得分離良好的細胞懸液、無細胞隨便、極少的細胞團塊,且細胞活力高(>70%);此外,了解您所研究細胞的大小范圍也很重要。細胞大小通常與細胞表達的轉錄本數(shù)量有關。各種尺寸不同的細胞(一般直徑不大于50μm)均可與我們基因表達解決方案中使用的10X Genomics平臺兼容。一般來說,細胞制備方案將根據(jù)組織來源和細胞類型而變化。每種組織類型都是獨特的,因此,必須在開始任何單細胞實驗之前優(yōu)化樣本制備,烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗,累積10+物種、50+組織的消化protocol,若您的樣本為組織,且尚未成功將組織樣本消化成單細胞懸液,烈冰將盡可能提供技術及實驗上的幫助。烈冰專精單細胞多組學測序領域。重慶高通量測序單細胞測序多組學測序
烈冰生物成立于2010年,與時俱進,堅持為科研學者提供國際前沿的高通量測序實驗和深度的生物信息數(shù)據(jù)分析服務,已逐步發(fā)展為單細胞多組學檢測服務****。專注于“單細胞測序系列技術服務”的專精領域,在上海、北京、廣州、西安和江西等地擁有數(shù)千平辦公場所,并布局多中心產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)基地和營銷、運營中心。2016年起連續(xù)被評為上海市****,60+項自主知識產(chǎn)權,轉化率近80%。產(chǎn)品覆蓋從單細胞測序,核測序,單細胞多組學,空間轉錄組測序等多組學聯(lián)合的實驗+數(shù)據(jù)分析全流程服務平臺。為600+國內(nèi)高校和醫(yī)院、5000+深度合作學者用戶、10000+生命科學探索的重要科研項目在醫(yī)藥開發(fā)、科學研究、醫(yī)學及臨床研究,疾病分子標志物篩選、生命和神經(jīng)發(fā)育研究等提供多層次、多組學檢測服務和解決方案,助力300+CNS國際學術期刊文章發(fā)表,30+篇單細胞技術聯(lián)合(助力)發(fā)文,IF 10+文章占比>65%。蘇州10X Chromium X單細胞測序全線搭建10x Genomics單細胞測序平臺。
一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲,小心得不償失,原因在這:單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行,而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,獲得細胞基因表達譜,通過降維(pca),無監(jiān)督聚類以及可視化(t-SNE)得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式,因此即使是相同的數(shù)據(jù),在剔除幾個細胞的情況下,前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當細胞捕獲數(shù)過多時,無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù),都會對正常細胞聚類產(chǎn)生影響,造成聚類結果失真。這也是很多文章,特別是很多高分文章,為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時,數(shù)據(jù)量在100G左右時,可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。
RNA測序(RNA-seq)或芯片分析等大量樣本的轉錄組學方法作為一類強大的工具,可提供混合樣本的基因表達平均數(shù)據(jù),幫助科學家開始揭示這種異質(zhì)性。隨后,技術創(chuàng)新的飛躍在單細胞技術上達到新高度——使得科學家能夠定義細胞類型特異的基因表達,從過去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅動其表達模式的細胞異質(zhì)性。這讓研究人員能夠更詳細地表征組織異質(zhì)性,鑒定稀有細胞類型,并逐個細胞地仔細分析其分子機制。當獲得了對其研究的生物系統(tǒng)更為真實的圖譜后,研究人員就有了更為堅實可靠的知識基礎,并能在這個基礎上規(guī)劃下一步實驗,以獲取更深入的可行動見解。烈冰科技已建立了多種國際和國內(nèi)主流的高通量測序實驗平臺。
現(xiàn)有的單細胞測序技術陣營在幾個主要領域存在差別。一個是分隔單個細胞以在其中進行微反應的物理平臺。在這個空間,單個細胞的內(nèi)容物釋放,轉錄本或其他生物分析物被標記或添加索引,以便下游識別?,F(xiàn)有技術的另一個主要區(qū)別是如何添加索引,就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細胞測序平臺采用動態(tài)微流控技(Drop-Seq具有類似的技術原理)。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,其中一列縱向孔道輸入細胞,凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上,并通過微流控技術,將之輸入到第二縱向孔道,即油相孔道中。這時候,就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠,那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,構成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構建文庫。測序可準確地分析基因表達差異、基因結構變異、篩選分子標記(SNPs或SSR)等生命科學重要問題。陜西10X Chromium X單細胞測序多組學測序
測序的革新讓科學研究從個體基因差異逐漸轉為個體細胞的基因差異。重慶高通量測序單細胞測序多組學測序
作為單細胞測序的一個重要里程碑,10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution,此平臺整合了儀器、試劑盒和信息學軟件,能精確對接illumina測序儀,因此可實現(xiàn)大量大細胞的快速高效標記、測序和分析,獲得單細胞水平的基因表達譜和差異情況,并通過對復雜細胞群體進行深入細致分析,繪制大規(guī)模單細胞表達圖譜。 以量化細胞內(nèi)的群體異質(zhì)性,并逐個鑒定細胞類型、細胞狀態(tài)和動態(tài)細胞躍遷。除了有望鑒定新的細胞亞型和稀有細胞群體,單細胞技術還能更好地了解轉錄動態(tài)和基因調(diào)控關系。重慶高通量測序單細胞測序多組學測序
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司總部位于江月路999號奇亞特中心22幢,是一家生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計算機科技領域內(nèi)的技術開發(fā)、技術服務、技術轉讓、技術咨詢,市場營銷策劃,市場信息咨詢與調(diào)查(不得從事社會調(diào)查、社會調(diào)研、民意調(diào)查、民意測驗),從事貨物及技術的進出口業(yè)務,計算機、軟件及耗材(除專控),軟件開發(fā)【依法須經(jīng)批準的項目,經(jīng)相關部門批準后方可開展經(jīng)營活動】的公司。烈冰生物作為醫(yī)藥健康的企業(yè)之一,為客戶提供良好的單細胞測序,生物大數(shù)據(jù)云分析平臺,空間轉錄組測序,單細胞多組學測序。烈冰生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術為先導,以產(chǎn)品為平臺,以應用為重點,以服務為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務。烈冰生物始終關注自身,在風云變化的時代,對自身的建設毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使烈冰生物在行業(yè)的從容而自信。