對于單細胞測序而言，常常需要先構(gòu)建細胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析，并且數(shù)據(jù)分析時以細胞聚類（cell cluster）為討論對象，而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象，因此單細胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴格，但是單細胞測序，特別是目的為圖譜研究時，需要通過提高樣本復雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細胞圖譜信息。因此，單細胞測序?qū)嶒炘O(shè)計時首先需要保證生物學重復，不同樣本來源的樣本建議單獨進行細胞解離和捕獲、建庫、測序，以保證捕獲到足夠的細胞數(shù)，單個樣本分別捕獲細胞時，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準確性。烈冰單細胞多組學測序助您探究細胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡特征。福州單細胞測序服務公司
一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲，小心得不償失，原因在這：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后，獲得細胞基因表達譜，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個細胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當細胞捕獲數(shù)過多時，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù)，都會對正常細胞聚類產(chǎn)生影響，造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時，數(shù)據(jù)量在100G左右時，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。廣州高通量測序單細胞測序數(shù)據(jù)分析十二年測序經(jīng)驗，累計服務與5000余項重要科研項目。
關(guān)于單細胞測序?qū)嶒灅颖局苽?，這與流式細胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對樣本進行染色，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質(zhì)量的單細胞懸液。
細胞計數(shù)和活力評估在評估樣本質(zhì)量時，需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力，這一點至關(guān)重要。測定細胞活力有許多種方法，烈冰多年單細胞測序經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數(shù)的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性，取決于我們了解樣本中有多少個細胞。一旦過濾和清洗完成，可采用細胞計數(shù)設(shè)備（如血球計數(shù)器或自動細胞計數(shù)儀）進行定量。這些設(shè)備不但能提供準確的細胞計數(shù)，還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。ATCG堿基的排列組合構(gòu)成了測序的龐大世界。
所謂的高通量測序技術(shù)，又名大規(guī)模平行測序，是將 DNA（或者 cDNA）隨機片段化、加接頭，制備測序文庫，通過對文庫中數(shù)以萬計的克隆(colony)進行延伸反應，檢測對應的信號，獲取序列信息。與傳統(tǒng)測序法（Sanger法等）相比，高通量測序技術(shù)在處理大規(guī)模樣品時具有明顯的優(yōu)勢，又快（兩天）又多（數(shù)百萬克隆），成為目前組學研究的主要技術(shù)。單細胞測序是一個系統(tǒng)的工程，開展項目前您可能會先評估它提供的見解是否與您的研究問題相匹配，如果匹配，實驗過程如何規(guī)劃，實驗平臺如何選擇，樣本如何制備，數(shù)據(jù)如何分析等等，而在這一切開始之前，我們的服務就已經(jīng)開始了，從銷售到實驗到專業(yè)技術(shù)支持，我們開通全線對接渠道，幫助您快速定位項目訴求，提供從實驗設(shè)計到文章發(fā)表的全流程，我們始終是您貼心的科學合作伙伴。單細胞測序平臺，烈冰提供高性價比服務方案。蘇州10X Genomics單細胞測序百萬通量平臺
單細胞多組學測序可識別重要的轉(zhuǎn)錄因子，進行譜系和發(fā)育追蹤。福州單細胞測序服務公司
10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫。福州單細胞測序服務公司
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