Fluidigm C1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測(cè)序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達(dá)（Fluidigm?）的微流控技術(shù)，大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類(lèi)的Single-Cell測(cè)序建庫(kù)。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是，現(xiàn)在很多非RNA類(lèi)Single Cell測(cè)序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如Single Cell DNA-Seq，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫(kù)。所以可以說(shuō)，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測(cè)序技術(shù)之前，C1仍然會(huì)是市場(chǎng)上的重要組成部分。烈冰科技成立10余年，為科研學(xué)者提供專(zhuān)注的測(cè)序數(shù)據(jù)分析服務(wù)。沈陽(yáng)單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)機(jī)構(gòu)
基于10X Next GEM技術(shù)，單細(xì)胞測(cè)序一次實(shí)驗(yàn)可以同時(shí)檢測(cè)近萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，可在一個(gè)樣本中同時(shí)獲3'端mRNA表達(dá)譜、如需和免疫組庫(kù)（TCR和BCR）的數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合時(shí)，即某些研究還需結(jié)合基因的表達(dá)譜和V(D)J數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析，監(jiān)測(cè)免疫療法的效果，研究疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，可進(jìn)行單細(xì)胞免疫組庫(kù)測(cè)序： 烈冰單細(xì)胞免疫組庫(kù)平臺(tái)具備：1000+項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)獲取1000-20000個(gè)細(xì)胞的文庫(kù)構(gòu)建，獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù)； 具備完善的免疫組庫(kù)測(cè)序和實(shí)驗(yàn)質(zhì)控流程，獲取V(D)J全長(zhǎng)序列的配對(duì)信息；豐富的免疫組庫(kù)測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)專(zhuān)屬個(gè)性化數(shù)據(jù)分析服務(wù)，搭配單細(xì)胞分析云平臺(tái)，一鍵導(dǎo)出交互性的動(dòng)態(tài)結(jié)果報(bào)告。濟(jì)南10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序烈冰引進(jìn)國(guó)際主流單細(xì)胞和空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序平臺(tái)，保障細(xì)胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細(xì)區(qū)域的空間信息。
10X Genomics和Drop-Seq具有類(lèi)似的技術(shù)原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上，并通過(guò)微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時(shí)候，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠，那么在每一個(gè)凝膠微珠中上長(zhǎng)滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個(gè)凝膠微珠抓手就會(huì)使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫(kù)。
10× Genomics官方建議，當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時(shí)應(yīng)做去除死細(xì)胞操作，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒(méi)有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作?；诹冶嗄陠渭?xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn)，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測(cè)后，考慮對(duì)細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細(xì)胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài)，失真嚴(yán)重，建議重新收集樣本進(jìn)行新的實(shí)驗(yàn)，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。全線搭建10X Genomics Chromium X單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)測(cè)序平臺(tái)。
10X Genomics 是一種基于 drop 的微流控技術(shù)，液體在配套芯片中的微管道中流動(dòng)，因此細(xì)胞直徑會(huì)受到芯片中微管道直徑的限制，微流體通道的直徑約為 50 ~ 60 um，因此捕獲細(xì)胞的直徑不能超過(guò) 40um。當(dāng)細(xì)胞直徑過(guò)大時(shí)，容易出現(xiàn)管道堵塞，造成GEM生成失敗，對(duì)于神經(jīng)科學(xué)研究和心血管疾病研究的老師而言，準(zhǔn)備采用單細(xì)胞技術(shù)用于課題研究的時(shí)候，往往會(huì)遇到一個(gè)尷尬的問(wèn)題，就是目標(biāo)細(xì)胞，例如神經(jīng)元細(xì)胞、成熟心肌細(xì)胞由于體積過(guò)大，不適用于 10X 單細(xì)胞技術(shù)。其中神經(jīng)元細(xì)胞的直徑很大，直接超過(guò)了芯片中管道的直徑，雖然心肌細(xì)胞直徑低于 50um，但是成熟心肌細(xì)胞的長(zhǎng)度很長(zhǎng)，有可能堵塞通道造成實(shí)驗(yàn)失敗，這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細(xì)胞文章，主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了，主要還是因?yàn)槲窗l(fā)育成熟的心肌細(xì)胞比較小，不會(huì)出現(xiàn)堵塞管道的風(fēng)險(xiǎn)。因此可以考慮組織解離后過(guò) 40um 濾網(wǎng)，過(guò)濾掉大細(xì)胞，避免出現(xiàn)管道堵塞、實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。此種方案的缺點(diǎn)是大細(xì)胞被過(guò)濾掉，丟失相關(guān)細(xì)胞數(shù)據(jù)；另外組織解離獲得高質(zhì)量細(xì)胞懸液以后，繼續(xù)做細(xì)胞裂解抽細(xì)胞核，開(kāi)展細(xì)胞核測(cè)序。具體可訪問(wèn)烈冰官網(wǎng)給我們留言，烈小冰將安排專(zhuān)業(yè)技術(shù)為您詳細(xì)解答。個(gè)性化制定測(cè)序項(xiàng)目方面，滿足從檢測(cè)基因到蛋白的多組學(xué)測(cè)序要求。長(zhǎng)沙10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化
烈冰對(duì)于一個(gè)細(xì)胞群體中的每個(gè)細(xì)胞單獨(dú)進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序分析。沈陽(yáng)單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)機(jī)構(gòu)
樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫(kù)制備步驟。在理想狀況下，一旦制備好樣本，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而，您還有必要了解各類(lèi)細(xì)胞的不同性質(zhì)，因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間，以及它們?cè)谥苽浜蠖嗑帽銘?yīng)當(dāng)被盡快使用。例如，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時(shí)間，它們就開(kāi)始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離，增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn)，而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù)，又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。此外，有些細(xì)胞更加粘稠，形成團(tuán)塊的速度更快。對(duì)于這些細(xì)胞，必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差。沈陽(yáng)單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)機(jī)構(gòu)
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)范圍是醫(yī)藥健康，擁有一支專(zhuān)業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場(chǎng)口碑。公司業(yè)務(wù)分為單細(xì)胞測(cè)序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái)，空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序等，目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn)，為客戶(hù)提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司注重以質(zhì)量為中心，以服務(wù)為理念，秉持誠(chéng)信為本的理念，打造醫(yī)藥健康良好品牌。在社會(huì)各界的鼎力支持下，持續(xù)創(chuàng)新，不斷鑄造***服務(wù)體驗(yàn)，為客戶(hù)成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。