Recombinant Mouse CD14 Protein

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-11-30

5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能夠從DNA鏈的5'端向3'端切除核苷酸的能力。這種活性通常用于修復(fù)受損的DNA或去除錯(cuò)誤配對(duì)的核苷酸。具體來說,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成過程中切除前方的核苷酸,幫助錯(cuò)誤或不需要的序列,從而確保DNA的正確復(fù)制和修復(fù)。在DNA聚合酶中,5'-3'外切核酸酶活性與聚合酶活性相輔相成。聚合酶在合成新鏈時(shí),5'-3'外切酶活性可以在發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤時(shí)進(jìn)行修正,確保合成的DNA鏈的準(zhǔn)確性。例如,E.coliDNA聚合酶I具有這種外切酶活性,可以在合成過程中去除錯(cuò)誤的核苷酸,從而提高DNA的保真度。需要注意的是,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,這使得它在某些應(yīng)用中更為穩(wěn)定,特別是在等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中,如LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)和RCA(滾環(huán)擴(kuò)增)等。去泛素化酶可以去除泛素化標(biāo)記,這一步驟是泛素化過程的逆轉(zhuǎn)過程,它允許細(xì)胞對(duì)泛素化事件進(jìn)行精細(xì)調(diào)控。Recombinant Mouse CD14 Protein,His Tag

Recombinant Mouse CD14 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)是一種熱穩(wěn)定的酶,它在高溫下(55-65°C)仍然保持活性,這使得它在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中非常有用,尤其是在需要高溫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)中,如熱循環(huán)擴(kuò)增(PCR)。BstDNAPolymeraseI具有以下特性:1.**熱穩(wěn)定性**:BstDNAPolymeraseI在高溫下具有較高的穩(wěn)定性,適用于高溫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn),如PCR。2.**3'到5'外切酶活性**:這種酶具有3'到5'外切酶活性,能夠切除DNA末端上的非特異性引物和雜交DNA,使其成為等溫?cái)U(kuò)增應(yīng)用的理想酶。3.**耐鹽性**:BstDNAPolymeraseI在高鹽條件下仍能保持穩(wěn)定活性,這在一些特殊的PCR應(yīng)用中非常有用。4.**等溫?cái)U(kuò)增**:由于其3'到5'外切酶活性,BstDNAPolymeraseI用于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP技術(shù),這種技術(shù)能夠在恒溫下進(jìn)行DNA擴(kuò)增,無需繁瑣的溫度循環(huán)。5.**快速PCR**:由于其高溫穩(wěn)定性,BstDNAPolymeraseI也可用于快速PCR反應(yīng),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。6.**高GC含量模板擴(kuò)增**:BstDNAPolymeraseI對(duì)高GC含量模板的擴(kuò)增效果較好,因此在一些難擴(kuò)增的模板中表現(xiàn)出色。RNases抑制劑Cas12a同源物能夠識(shí)別更簡單的PAM序列(如5-TTN),這使得基因組的覆蓋率顯著提高。

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蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一種特殊的融合蛋白,它結(jié)合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**融合表達(dá)產(chǎn)物**:pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達(dá)產(chǎn)物,因此它同時(shí)具有ProteinA的抗體結(jié)合活性和MNase的核酸內(nèi)切酶活性。2.**雙重功能**:由于其雙重功能,pA-MNase常用于蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究,特別是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技術(shù)中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的細(xì)胞壁表面蛋白,分子量為42kDa,能特異性地與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結(jié)合,通常結(jié)合部位為免疫球蛋白的Fc區(qū)。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一種核酸內(nèi)切酶,能夠降解核酸,常用于降解蛋白質(zhì)制備中存在的核酸,減少細(xì)胞裂解液的粘度,以及用于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析和快速RNA測序。5.**反應(yīng)條件**:MNase的反應(yīng)條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要補(bǔ)充100μg/ml重組白蛋白,分子生物學(xué)級(jí),并在37°C下孵化。

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP和CPA等。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號(hào)14402ES,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,貨號(hào)14405ES,不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測,且在飛克(fg)級(jí)別的模板量下也能快速達(dá)到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對(duì)穩(wěn)定的效應(yīng)長達(dá)5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲(chǔ)存條件:建議在-25℃至-15℃下儲(chǔ)存,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融。泛素連接酶E3識(shí)別特定的靶蛋白,并促進(jìn)E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標(biāo)記。

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磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA,這對(duì)于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對(duì)于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對(duì)于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)。4.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物,去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì),為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動(dòng)化和高通量操作**:磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合,適合高通量樣本處理,這對(duì)于大規(guī)?;蚩寺№?xiàng)目尤為重要。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。泛素蛋白的C末端通常通過酰胺鍵與靶蛋白的氨基團(tuán)連接在一起,最常見的是與靶蛋白賴氨酸的ε氨基團(tuán)相連。Recombinant Mouse CD14 Protein,His Tag

UBE2L3作為泛素化途徑中的關(guān)鍵酶,其在蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期控制等重要內(nèi)容有著作用。Recombinant Mouse CD14 Protein,His Tag

Cre重組酶在基因編輯中的操作主要涉及以下幾個(gè)步驟:1.**識(shí)別與結(jié)合**:-Cre重組酶首先識(shí)別并分別結(jié)合兩個(gè)LoxP序列的兩個(gè)反向重復(fù)序列,形成一個(gè)二聚體。2.**四聚體形成**:-兩個(gè)二聚體互相靠近,形成由四個(gè)Cre分子與兩個(gè)LoxP位點(diǎn)結(jié)合形成的四聚體復(fù)合物。3.**DNA切割與交換**:-Cre重組酶在每個(gè)LoxP位點(diǎn)的間隔序列中引導(dǎo)單鏈切割,產(chǎn)生帶有3’端羥基的斷裂。每個(gè)LoxP位點(diǎn)的兩個(gè)單鏈分別被切割。切割產(chǎn)生的自由3’端與對(duì)側(cè)的3’端進(jìn)行交換和重連,形成Holliday交叉結(jié)構(gòu)。4.**分子重組與解旋**:-Holliday交叉結(jié)構(gòu)通過Cre酶的作用被解旋并重組,形成新的重組產(chǎn)物。這個(gè)過程導(dǎo)致兩個(gè)LoxP位點(diǎn)之間的DNA序列被刪除、反轉(zhuǎn)或易位,具體效果取決于LoxP序列的排列方式(方向和位置)。5.**條件性基因編輯**:-通過建立特異性Cre小鼠,該小鼠中的Cre重組酶由特定啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng),可在特定細(xì)胞或組織或全身表達(dá)Cre重組酶。與帶有Lox位點(diǎn)的Flox小鼠雜交,子代中可以獲得既帶有Cre又帶有Flox基因的小鼠,實(shí)現(xiàn)條件性基因打靶(表達(dá)或敲除靶基因)。Recombinant Mouse CD14 Protein,His Tag