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重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學(xué)研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高熒光強(qiáng)度**:EGFP比野生型GFP具有更強(qiáng)的熒光,這使得它在成像和檢測(cè)時(shí)更為敏感和有效。2.**改進(jìn)的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細(xì)胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡(jiǎn)化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號(hào)的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報(bào)告基因用于基因表達(dá)分析,也可以作為融合標(biāo)簽用于蛋白質(zhì)定位和動(dòng)態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達(dá)的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長(zhǎng)時(shí)間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個(gè)氨基酸構(gòu)成。Ultra-Long Master Mix 在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用主要集中在需要擴(kuò)增長(zhǎng)片段DNA序列的場(chǎng)合。Recombinant Rat IL-1 beta Protein
PreScissionProtease(PSP)是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶(humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease)和GST組成的融合蛋白。它具有以下特點(diǎn):1.**特異性識(shí)別**:PreScissionProtease能在低溫下(4°C)特異識(shí)別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。2.**依賴結(jié)構(gòu)**:底物的識(shí)別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu),還依賴于融合蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。3.**分離GST標(biāo)簽**:它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達(dá)出的帶有酶底物識(shí)別多肽序列融合蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行分離。4.**表達(dá)宿主**:本品由大腸桿菌中重組表達(dá),并以無(wú)菌液體形式提供。5.**物理性質(zhì)**:分子量約為46kDa,物理外觀為無(wú)菌無(wú)色液體。6.**儲(chǔ)存緩沖液**:25mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl,1mMEDTA,5mMDTT,50%(V/V)Glycerin。7.**酶切緩沖液**:10×酶切緩沖液為500mMTris-HCl(pH7.0),1.5MNaCl,10mMEDTA,10mMDTT。8.**純度**:經(jīng)SDS-PAGE及HPLC分析,純度大于95%。9.**酶活定義**:在5℃條件下反應(yīng)16小時(shí),能夠切割10μg的GST標(biāo)簽的融合蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。Recombinant Rat IL-1 beta Protein隨后,泛素分子從E1轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2,再通過(guò)泛素連接酶E3的作用,將泛素分子連接到靶蛋白上。
BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)在PCR中的應(yīng)用具有多個(gè)優(yōu)勢(shì),以下是一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性,這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)。在這些技術(shù)中,BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特異性地?cái)U(kuò)增模板,在10到30分鐘內(nèi)將痕量的核酸模板(低至單拷貝)擴(kuò)增至可以檢出的水平。2.**高溫穩(wěn)定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它在一些需要高溫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件下表現(xiàn)出色。3.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫?cái)U(kuò)增中展現(xiàn)出高靈敏度,能夠?qū)⑽⒘亢怂崮0鍞U(kuò)增到可檢測(cè)水平。同時(shí),它也具有高特異性,減少了非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)。4.**簡(jiǎn)化的樣品處理**:BsuDNAPolymerase可以直接對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行擴(kuò)增,無(wú)需事先進(jìn)行復(fù)雜的核酸純化和提取步驟,節(jié)省了時(shí)間和成本。5.**可擴(kuò)增DNA和RNA**:BsuDNAPolymerase不僅可以擴(kuò)增DNA,還可以直接擴(kuò)增RNA,省去了額外的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(cDNA合成)步驟,這對(duì)于RNA的檢測(cè)和分析更加方便快捷。6.**無(wú)核酸外切酶和RNase殘留**:BsuDNAPolymerase在生產(chǎn)過(guò)程中確保無(wú)核酸外切酶、切口酶及RNase殘留,這有助于提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割后,可以采用以下方法來(lái)提高產(chǎn)品的純度:1.**親和層析**:利用GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽等進(jìn)行一步或多步親和層析,以高純度分離目的蛋白。2.**離子交換層析**:根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷特性,使用陽(yáng)離子或陰離子交換層析進(jìn)一步純化蛋白質(zhì)。3.**凝膠滲透層析**:通過(guò)分子大小的排阻,去除分子量較大或較小的雜質(zhì)。4.**反向?qū)游?*:使用反相高效液相色譜(HPLC)技術(shù),根據(jù)蛋白質(zhì)與固定相的疏水相互作用進(jìn)行分離。5.**超濾/透析**:使用超濾膜或透析袋去除低分子量的雜質(zhì),如鹽分、緩沖液成分或小分子蛋白質(zhì)。6.**二次親和層析**:在初次親和層析后,可以進(jìn)行二次親和層析以進(jìn)一步提高純度。7.**蛋白質(zhì)純化柱**:使用商業(yè)化的蛋白質(zhì)純化柱,如GST-Sepharose或Ni-NTA柱,進(jìn)行快速純化。8.**等電聚焦電泳**:通過(guò)等電聚焦電泳(IEF)分離具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)。9.**SDS-PAGE**:使用SDS-PAGE凝膠電泳分析蛋白質(zhì)的純度,并可通過(guò)凝膠切片回收相對(duì)純凈的蛋白質(zhì)條帶。10.**質(zhì)譜分析**:利用質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)的確切質(zhì)量和序列來(lái)確保蛋白質(zhì)的純度和正確性。去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes, DUBs)可以去除泛素化蛋白上的泛素鏈,使泛素分子得以回收和再利用。
嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)和它的大片段(LargeFragment)是兩種在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的酶。它們的主要區(qū)別在于結(jié)構(gòu)和活性:1.**結(jié)構(gòu)**:-完整的BstDNAPolymeraseI包含一個(gè)5'→3'的核酸外切酶活性區(qū)域,而大片段是通過(guò)基因工程改造或蛋白酶處理去掉了這個(gè)外切酶活性區(qū)域的酶。因此,大片段沒有5'→3'的核酸外切酶活性,但保留了5'→3'的DNA聚合酶活性。2.**活性**:-BstDNAPolymeraseI具有5'→3'的核酸外切酶活性,這意味著它在合成DNA的同時(shí)可以“校對(duì)”錯(cuò)誤,切除不匹配的核苷酸。而大片段由于缺少外切酶活性區(qū)域,不具有這種校對(duì)能力。-大片段具有更強(qiáng)的鏈置換能力,這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)。3.**應(yīng)用**:-BstDNAPolymeraseI由于具有校對(duì)功能,可能更適合于需要高保真度的DNA合成反應(yīng)。-BstDNAPolymerase,LargeFragment由于其鏈置換能力,更適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),這些技術(shù)不需要熱循環(huán)儀,可以在恒定溫度下進(jìn)行DNA擴(kuò)增。4.**熱穩(wěn)定性**:-BstDNAPolymerase,LargeFragment通常在65°C左右的溫度下進(jìn)行反應(yīng),而BstDNAPolymeraseI可能具有更寬的反應(yīng)溫度范圍。研究表明,優(yōu)化后的Cas12a系統(tǒng)在多種細(xì)胞類型中表現(xiàn)出良好的編輯效率。Recombinant Human/Mouse/Goat Cpn10/HSPE1 Protein,His-Avi Tag
One Step RT-qPCR SYBR Green Kit 是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的試劑盒,它結(jié)合了反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增步驟。Recombinant Rat IL-1 beta Protein
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種經(jīng)過(guò)改造的酶,它來(lái)源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)DNA聚合酶I,通過(guò)重組技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)并純化獲得。這種酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性,但不具有5'→3'的核酸外切酶活性,因此它在等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中非常有用,如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)等。以下是BstDNAPolymerase,LargeFragment的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**等溫?cái)U(kuò)增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有很強(qiáng)的鏈置換能力,適用于多種等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),這些反應(yīng)通常在50-68°C之間進(jìn)行,比較好反應(yīng)溫度為65°C。2.**快速測(cè)序**:由于其高聚合酶活性,BstDNAPolymerase,LargeFragment可以用于快速測(cè)序,特別是對(duì)于高GC含量的DNA模板或微量(納克量級(jí))DNA模板的測(cè)序。3.**全基因組擴(kuò)增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment也可用于全基因組擴(kuò)增(WGA),這是一種在不需要熱循環(huán)儀的情況下擴(kuò)增整個(gè)基因組DNA的技術(shù)。4.**高dUTP耐受性**:與BstDNAPolymerase2.0相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment在進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增時(shí)不具有將dUTP摻入合成的DNA鏈的能力,這使得它在某些應(yīng)用中更具優(yōu)勢(shì)。Recombinant Rat IL-1 beta Protein