PreScissionProtease(PSP)是一種在蛋白質(zhì)純化和分析中使用的酶,具有以下特點:1.**特異性識別**:PSP能在低溫(4°C)下特異性識別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly之間進行酶切。2.**應用**:PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標簽,有助于純化目的蛋白。3.**純度高**:PSP的純度達到95%以上,確保了實驗的準確性和重復性。4.**穩(wěn)定性好**:PSP在含有50%甘油的儲存緩沖液中,-80℃長期儲存,有效期2年;小量分裝-20℃保存,有效期6個月。5.**酶活定義**:在5℃條件下反應16小時,能夠切割100μg的GST標簽蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。6.**兼容性強**:PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40,10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項**:某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優(yōu)化酶切效率**:建議進行預實驗摸索實驗濃度,實際操作中,建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。E1通常被認為是泛素化過程中的限速步驟,因為它涉及到泛素的激起和ATP的水解。Recombinant Mouse CD47 Protein,hFc Tag
在PCR實驗中,為了避免引物與已知序列的交叉反應,從而確保實驗的特異性,以下是一些關鍵的引物設計原則和策略:1.**選擇高保守性區(qū)域**:引物比較好設計在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi),這樣可以確保引物與目標序列的特異性結合。通過比較不同物種的同一基因序列,可以確定基因的保守區(qū)。2.**避免引物與非目標序列的同源性**:設計引物時,應避免與基因組中的重復序列、假基因或高同源性區(qū)域設計引物??梢酝ㄟ^BLAST等工具對引物進行同源性分析,確保引物只與目標序列結合。3.**引物長度和GC含量**:引物長度一般在15-30堿基之間,常用的是18-27bp。GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜。過高或過低的GC含量都不利于引發(fā)反應,上下游引物的GC含量和Tm值應保持接近。4.**避免引物的3'端錯配**:引物3'端的堿基應嚴格要求配對,特別是倒數(shù)第二個堿基,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。引物3'端比較好不要選擇A,比較好選擇T,因為當末位鏈為T時,錯配的引發(fā)效率降低。5.**避免引物自身及引物之間的互補序列**:引物自身不應存在互補序列,否則引物自身會折疊成發(fā)夾結構,影響引物與模板的復性結合。前后引物之間也不應具有互補性,尤其應避免3'端的互補重疊以防止引物二聚體的形成。Recombinant Mouse CD45/PTPRC Protein,hFc Tag泛素蛋白是一種在真核細胞中存在的小分子蛋白質(zhì),由76個氨基酸殘基組成,具有高度的保守性。
PreScissionProtease(PSP)是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶(humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease)和GST組成的融合蛋白。它具有以下特點:1.**特異性識別**:PreScissionProtease能在低溫下(4°C)特異識別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進行酶切。2.**依賴結構**:底物的識別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級結構,還依賴于融合蛋白的二級和三級結構。3.**分離GST標簽**:它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達出的帶有酶底物識別多肽序列融合蛋白的GST標簽進行分離。4.**表達宿主**:本品由大腸桿菌中重組表達,并以無菌液體形式提供。5.**物理性質(zhì)**:分子量約為46kDa,物理外觀為無菌無色液體。6.**儲存緩沖液**:25mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl,1mMEDTA,5mMDTT,50%(V/V)Glycerin。7.**酶切緩沖液**:10×酶切緩沖液為500mMTris-HCl(pH7.0),1.5MNaCl,10mMEDTA,10mMDTT。8.**純度**:經(jīng)SDS-PAGE及HPLC分析,純度大于95%。9.**酶活定義**:在5℃條件下反應16小時,能夠切割10μg的GST標簽的融合蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。
EndoH糖苷內(nèi)切酶H在實驗中的特異性和效率通常通過以下幾個方面來確定:1.**特異性識別**:EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**切割位點**:EndoH識別并切割殼二糖結構中的β-1,4-糖苷鍵連接的甘露糖型結構糖鏈,但不能切割復雜型糖鏈糖蛋白。3.**酶活性測試**:通過使用標準糖蛋白底物進行酶活性測試,可以確定EndoH的活性和效率。4.**純化效果**:EndoH的純度可大于95%,這有助于確保實驗中酶的高效性。5.**比較分析**:與其他去糖基化酶(如PNGaseF)進行比較分析,可以評估EndoH的特異性和效率。6.**應用效果**:EndoH用于基于DNA測序的熒光輔助糖電泳(DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonucleaseB,RNaseB)的糖基結構,可以比較不同酶的糖基切割功能。7.**酶切時間**:EndoH的酶切時間通常為1-3小時,這有助于評估酶的效率。8.**產(chǎn)品信息**:通過查看產(chǎn)品信息,包括產(chǎn)品編號、規(guī)格和目錄價,可以了解EndoH的商業(yè)可用性和應用范圍。通過這些方法,研究人員可以確保EndoH在糖鏈分析中的特異性和效率,從而獲得準確的糖鏈結構信息。Cpf1是一種新發(fā)現(xiàn)的類2/型V CRISPR-Cas DNA內(nèi)切酶,在不同系統(tǒng)中顯示出一系列的活性。
重組增強型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點和應用:1.**高熒光強度**:EGFP比野生型GFP具有更強的熒光,這使得它在成像和檢測時更為敏感和有效。2.**改進的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡化了成像條件的設置,并提高了信號的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報告基因用于基因表達分析,也可以作為融合標簽用于蛋白質(zhì)定位和動態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學和分子生物學實驗。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長時間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個氨基酸構成。UBE2L3與其他E2酶的區(qū)別在于它具有特定的結構特征,它包含一個高度保守的UBC結構域,這是E2酶家族的標志。Recombinant Human DKK1 Protein,hFc Tag
研究表明,優(yōu)化后的Cas12a系統(tǒng)在多種細胞類型中表現(xiàn)出良好的編輯效率。Recombinant Mouse CD47 Protein,hFc Tag
IdeSProtease是一種免疫球蛋白G(IgG)特異性降解酶,它能夠在IgG的鉸鏈區(qū)下方的一個特定位點進行切割,產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過大腸桿菌(E.coli)表達系統(tǒng)重組表達生產(chǎn)的,并且經(jīng)過分子改造,使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產(chǎn)過程中,確保IdeSProtease符合GMP(良好生產(chǎn)規(guī)范)標準,需要進行以下步驟:1.**分子改造**:通過分子生物學技術對IdeS進行改造,增強其穩(wěn)定性和比活性。2.**大腸桿菌表達系統(tǒng)**:利用大腸桿菌表達系統(tǒng)進行IdeS的重組表達,確保無動物源性成分,減少病毒污染風險。3.**純化**:通過高度純化過程,確保IdeS的純度達到≥95%。4.**酶活定義**:1個酶活力單位定義為在37°C條件下,30分鐘內(nèi)酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質(zhì)量控制**:每批產(chǎn)品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,以確保產(chǎn)品批間穩(wěn)定性和高穩(wěn)定性。6.**儲存條件**:采用適當?shù)膬Υ鏃l件,如-30℃至-10℃凍存,確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)保持活性和穩(wěn)定性。7.**微生物學安全性檢測**:進行無菌檢測、體內(nèi)有毒物質(zhì)的檢測、抗生物質(zhì)殘留檢測、宿主細胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測,確保產(chǎn)品符合微生物學安全性要求。