Recombinant Canine AFP Protein

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-10-17

重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學(xué)研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高熒光強(qiáng)度**:EGFP比野生型GFP具有更強(qiáng)的熒光,這使得它在成像和檢測(cè)時(shí)更為敏感和有效。2.**改進(jìn)的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細(xì)胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡(jiǎn)化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號(hào)的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報(bào)告基因用于基因表達(dá)分析,也可以作為融合標(biāo)簽用于蛋白質(zhì)定位和動(dòng)態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達(dá)的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長(zhǎng)時(shí)間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個(gè)氨基酸構(gòu)成。E1通常被認(rèn)為是泛素化過(guò)程中的限速步驟,因?yàn)樗婕暗椒核氐募て鸷虯TP的水解。Recombinant Canine AFP Protein,His Tag

Recombinant Canine AFP Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

大腸桿菌表達(dá)的重組抑肽酶(Aprotinin)是一種通過(guò)基因工程技術(shù)在大腸桿菌中生產(chǎn)的蛋白酶抑制劑,具有以下特性和應(yīng)用:1.**來(lái)源**:重組抑肽酶是通過(guò)大腸桿菌(E.coli)表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的,確保了無(wú)動(dòng)物源性成分,減少了病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。2.**結(jié)構(gòu)**:它是一種單體球狀蛋白,由58個(gè)氨基酸組成,具有三個(gè)交聯(lián)二硫鍵的單個(gè)多肽鏈。3.**功能**:作為一種競(jìng)爭(zhēng)性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,重組抑肽酶能夠抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶等的活性。4.**應(yīng)用**:在生物技術(shù)過(guò)程中,重組抑肽酶可以替代動(dòng)物源性抑肽酶,用于重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性,以及在細(xì)胞培養(yǎng)等過(guò)程中。5.**產(chǎn)品信息**:通常以粉末形式提供,具有明確的貨號(hào)和規(guī)格,如1mg或10mg的包裝。6.**產(chǎn)品性質(zhì)**:包括外觀、溶解度、純度、蛋白含量、酶濃度和活性定義等詳細(xì)參數(shù)。7.**儲(chǔ)存條件**:凍干粉在2~8℃保存,有效期為2年。8.**使用方法**:推薦的結(jié)合pH>6.0,在pH<3.0的條件下不結(jié)合,可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃儲(chǔ)存。9.**注意事項(xiàng)**:產(chǎn)品作科研用途,操作時(shí)需穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。Recombinant Human TNFRSF11B Protein,His TagFnCas12a在完成特異性切割后,還能非特異性地切割其他單鏈DNA,這一特性被用于開(kāi)發(fā)了多種核酸檢測(cè)技術(shù)。

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IdeSProtease的分子改造技術(shù)主要通過(guò)以下幾個(gè)方面提高其穩(wěn)定性和比活性:1.**定向進(jìn)化**:利用定向進(jìn)化方法,通過(guò)多輪的突變和篩選,獲得具有改善特性的酶變體。定向進(jìn)化不依賴于大規(guī)模突變文庫(kù)的構(gòu)建,而是通過(guò)定點(diǎn)突變操作,顯著提高酶分子的穩(wěn)定性。2.**半理性設(shè)計(jì)與理性設(shè)計(jì)**:結(jié)合半理性設(shè)計(jì)和理性設(shè)計(jì)的方法,通過(guò)計(jì)算模擬和結(jié)構(gòu)分析,對(duì)酶的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化,以提高其在各種環(huán)境條件下的穩(wěn)定性。3.**糖基化修飾**:作為一種新的酶分子穩(wěn)定性改造技術(shù),糖基化可以提高酶的穩(wěn)定性,防止酶在逆境中的失活,從而提高其在實(shí)際應(yīng)用中的催化活性。4.**消除蛋白質(zhì)中的不穩(wěn)定性弱點(diǎn)**:通過(guò)分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的穩(wěn)定性弱點(diǎn),進(jìn)行定點(diǎn)突變,以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的整體穩(wěn)定性。5.**提高比活性**:通過(guò)分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的濃度下就能有效地催化反應(yīng),從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對(duì)小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。

在ADCs(抗體藥物偶聯(lián)物)的制備過(guò)程中,確保藥物的穩(wěn)定性和生物活性是至關(guān)重要的。以下是幾個(gè)關(guān)鍵步驟和技術(shù)要點(diǎn):1.**藥物抗體比(DAR)的控制**:DAR是影響ADC穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素。通過(guò)控制DAR和藥物負(fù)荷分布,可以促進(jìn)ADC的穩(wěn)定性。DAR值在2-4之間通常被認(rèn)為是好的選擇,但后面的DAR值需要通過(guò)穩(wěn)定性試驗(yàn)、體內(nèi)有效性和藥代動(dòng)力學(xué)共同決定。2.**連接子的選擇**:連接子在化學(xué)過(guò)程中、血漿循環(huán)以及產(chǎn)品儲(chǔ)存過(guò)程中的穩(wěn)定性非常關(guān)鍵。連接子的選擇決定了抗體藥物的DAR,并且連接子的穩(wěn)定性影響著ADC的整體穩(wěn)定性。3.**有效載荷的選擇**:有效載荷對(duì)ADC的毒性和生物活性至關(guān)重要。選擇具有高度細(xì)胞毒性且能在靶細(xì)胞內(nèi)有效釋放的有效載荷是必要的。同時(shí),有效載荷及其代謝形式?jīng)Q定了ADC分子的毒性。4.**制劑配方的優(yōu)化**:ADC的制劑配方需要考慮抗體、連接子和有效載荷的穩(wěn)定性和特性。pH值、緩沖液、離子強(qiáng)度、表面活性劑和抗氧化劑等都可能影響ADC的穩(wěn)定性。5.**避免聚集**:ADC的聚集傾向比單獨(dú)的抗體更高,因此需要采取措施減少聚集,如使用非離子表面活性劑和優(yōu)化凍干工藝。

泛素連接酶E3識(shí)別特定的靶蛋白,并促進(jìn)E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標(biāo)記。

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提高SpCas9蛋白在基因編輯中的特異性和效率是CRISPR-Cas9技術(shù)發(fā)展的關(guān)鍵。根據(jù)新的研究進(jìn)展,以下是一些提高SpCas9特異性和效率的策略:1.**工程化改造**:通過(guò)定向進(jìn)化和蛋白工程的方法,研究人員可以對(duì)SpCas9進(jìn)行改造,以提高其在細(xì)胞中的基因編輯活性。例如,JenniferDoudna團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的工程化iGeoCas9,通過(guò)在WED結(jié)構(gòu)域引入突變,顯著提高了基因編輯效率,比野生型GeoCas9高出100倍以上。2.**優(yōu)化gRNA設(shè)計(jì)**:合理設(shè)計(jì)的gRNA可以提高Cas9的特異性,減少脫靶效應(yīng)。研究人員通過(guò)生物信息學(xué)工具和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,篩選出與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)性更強(qiáng)且特異性更高的gRNA。3.**使用高保真Cas9變體**:研究人員開(kāi)發(fā)了高保真Cas9變體,這些變體在保持編輯活性的同時(shí),降低了脫靶風(fēng)險(xiǎn)。例如,通過(guò)突變Cas9蛋白的關(guān)鍵氨基酸殘基,可以減少其在非目標(biāo)位點(diǎn)的切割活性。4.**PAM序列的優(yōu)化**:通過(guò)改變Cas9蛋白的PAM序列識(shí)別能力,可以擴(kuò)大其靶向范圍,從而提高編輯效率。例如,開(kāi)發(fā)能夠識(shí)別非典型PAM序列的Cas9變體。5.**遞送系統(tǒng)的優(yōu)化**:使用核糖核的蛋白(RNP)復(fù)合物的形式遞送Cas9和gRNA,可以提高Cas9蛋白的穩(wěn)定性和編輯效率。這種方法避免了mRNA或質(zhì)粒遞送可能引起的免疫反應(yīng)。CRISPR-Cas12a(以前稱為Cpf1)是一種類II型V型內(nèi)切酶,偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復(fù)序列鄰近基序。Recombinant Human TNFR1/CD120a/TNFRSF1A Protein,hFc Tag

E1在ATP的存在下激發(fā)泛素分子,通過(guò)一個(gè)硫酯鍵將泛素的C末端甘氨酸殘基與E1酶的活性連接起來(lái)。Recombinant Canine AFP Protein,His Tag

EndoS糖苷內(nèi)切酶在抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的制備中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。EndoS是一種特異性的內(nèi)切糖苷酶,它能夠從IgG重鏈的N-糖基中切割N-連接的糖鏈。這種特異性使得EndoS在改造抗體的糖鏈結(jié)構(gòu)時(shí)非常有用,尤其是在開(kāi)發(fā)定點(diǎn)ADCs時(shí)。在ADCs的制備過(guò)程中,EndoS的作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**糖鏈切割**:EndoS能夠特異性地水解抗體Fc片段上的N-糖鏈,為后續(xù)的糖鏈改造和藥物偶聯(lián)提供條件。2.**糖鏈改造**:EndoS可以用于去除抗體上的原有糖鏈,然后通過(guò)酶的催化作用,將特定的糖鏈結(jié)構(gòu)重新連接到抗體上,實(shí)現(xiàn)糖鏈的定點(diǎn)修飾。3.**定點(diǎn)偶聯(lián)**:通過(guò)EndoS的催化作用,可以將小分子細(xì)胞毒藥物通過(guò)特定的糖鏈結(jié)構(gòu)“一步”定點(diǎn)連接到抗體的糖基化位點(diǎn),簡(jiǎn)化了ADCs的制備流程。4.**提高ADCs的均一性和穩(wěn)定性**:EndoS介導(dǎo)的定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)有助于獲得結(jié)構(gòu)均一性更好、穩(wěn)定性更高的ADCs,這對(duì)于提高藥物療效和減少副作用至關(guān)重要。5.**增強(qiáng)療效**:利用EndoS進(jìn)行的定點(diǎn)偶聯(lián)可以提高ADCs的體內(nèi)瘤抑制活性,即使在低載藥量的情況下也能保持高效的抗瘤效果。

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