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酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(PNGaseF)在實(shí)際應(yīng)用中具有以下優(yōu)勢(shì):1.**高比活性**:具有高達(dá)750,000U/mL的比活性,這表明該酶在催化反應(yīng)中具有很高的效率。2.**快速反應(yīng)**:新型的FastPNGaseF能在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無偏好性的去糖基化,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。3.適用性:PNGaseF可以用于天然或變性條件下的糖蛋白或糖多肽的去N-糖基化修飾。4.**無其他糖苷酶活性**:該酶專一性高,無其他糖苷酶活性,確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。5.**His標(biāo)簽**:帶有His標(biāo)簽,便于通過親和層析進(jìn)行純化和檢測(cè)。6.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件**:在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中,-15~-25℃保存,有效期長達(dá)1年。7.**簡(jiǎn)化的實(shí)驗(yàn)流程**:FastPNGaseF簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程,減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,同時(shí)保持了靈敏度和重復(fù)性。8.**兼容性好**:去糖基化后的產(chǎn)物可以直接用于下游的色譜或質(zhì)譜分析,無需額外的純化步驟。9.**無偏好性**:能夠迅速且無偏好性地去除所有的N-糖鏈,確保了獲得的糖鏈分布能夠表示抗體的正確組成。蛋白在表達(dá)過程中形成包涵體,需要通過復(fù)性步驟恢復(fù)其活性。這通常涉及物質(zhì)的存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊。Recombinant Mouse IL-19
EndoS糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S)的特異性主要體現(xiàn)在其對(duì)糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)的識(shí)別和切割能力上。以下是Endo-S的一些關(guān)鍵特異性特點(diǎn):1.**糖鏈識(shí)別**:Endo-S能夠特異性識(shí)別糖鏈結(jié)構(gòu)中的某些特定序列或結(jié)構(gòu),尤其是N-連接糖鏈的殼二糖重要結(jié)構(gòu)。2.**切割位點(diǎn)**:Endo-S在糖鏈的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割,通常是在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的β-N-糖苷鍵。3.**不影響抗原性**:Endo-S的切割位點(diǎn)選擇性高,不會(huì)破壞糖蛋白的抗原決定簇,因此在某些應(yīng)用中可以保持糖蛋白的免疫原性。4.**應(yīng)用多樣性**:Endo-S可以用于多種糖蛋白的去糖基化,包括抗體和其他具有N-連接糖鏈的蛋白質(zhì)。5.**研究和藥物開發(fā)**:在研究糖蛋白的結(jié)構(gòu)和功能時(shí),Endo-S提供了一種工具來研究糖鏈對(duì)蛋白質(zhì)性質(zhì)的影響。此外,在藥物開發(fā)中,Endo-S用于制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物,通過精確控制藥物與抗體的連接點(diǎn),提高藥物的療效和減少副作用。6.**兼容性**:Endo-S對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物,實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。7.**高效性**:Endo-S在催化糖鏈轉(zhuǎn)移或切割反應(yīng)中表現(xiàn)出高效性,有助于實(shí)現(xiàn)高效獲得功能修飾的糖工程抗體。Recombinant Mouse CCL4/MIP-1 beta ProteinUltra-Long Master Mix 在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用主要集中在需要擴(kuò)增長片段DNA序列的場(chǎng)合。
PreScissionProtease(PSP)是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶(humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease)和GST組成的融合蛋白。它具有以下特點(diǎn):1.**特異性識(shí)別**:PreScissionProtease能在低溫下(4°C)特異識(shí)別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。2.**依賴結(jié)構(gòu)**:底物的識(shí)別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu),還依賴于融合蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。3.**分離GST標(biāo)簽**:它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達(dá)出的帶有酶底物識(shí)別多肽序列融合蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行分離。4.**表達(dá)宿主**:本品由大腸桿菌中重組表達(dá),并以無菌液體形式提供。5.**物理性質(zhì)**:分子量約為46kDa,物理外觀為無菌無色液體。6.**儲(chǔ)存緩沖液**:25mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl,1mMEDTA,5mMDTT,50%(V/V)Glycerin。7.**酶切緩沖液**:10×酶切緩沖液為500mMTris-HCl(pH7.0),1.5MNaCl,10mMEDTA,10mMDTT。8.**純度**:經(jīng)SDS-PAGE及HPLC分析,純度大于95%。9.**酶活定義**:在5℃條件下反應(yīng)16小時(shí),能夠切割10μg的GST標(biāo)簽的融合蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。
EndoH糖苷內(nèi)切酶H在實(shí)驗(yàn)中的特異性和效率通常通過以下幾個(gè)方面來確定:1.**特異性識(shí)別**:EndoH能夠特異性地識(shí)別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**切割位點(diǎn)**:EndoH識(shí)別并切割殼二糖結(jié)構(gòu)中的β-1,4-糖苷鍵連接的甘露糖型結(jié)構(gòu)糖鏈,但不能切割復(fù)雜型糖鏈糖蛋白。3.**酶活性測(cè)試**:通過使用標(biāo)準(zhǔn)糖蛋白底物進(jìn)行酶活性測(cè)試,可以確定EndoH的活性和效率。4.**純化效果**:EndoH的純度可大于95%,這有助于確保實(shí)驗(yàn)中酶的高效性。5.**比較分析**:與其他去糖基化酶(如PNGaseF)進(jìn)行比較分析,可以評(píng)估EndoH的特異性和效率。6.**應(yīng)用效果**:EndoH用于基于DNA測(cè)序的熒光輔助糖電泳(DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonucleaseB,RNaseB)的糖基結(jié)構(gòu),可以比較不同酶的糖基切割功能。7.**酶切時(shí)間**:EndoH的酶切時(shí)間通常為1-3小時(shí),這有助于評(píng)估酶的效率。8.**產(chǎn)品信息**:通過查看產(chǎn)品信息,包括產(chǎn)品編號(hào)、規(guī)格和目錄價(jià),可以了解EndoH的商業(yè)可用性和應(yīng)用范圍。通過這些方法,研究人員可以確保EndoH在糖鏈分析中的特異性和效率,從而獲得準(zhǔn)確的糖鏈結(jié)構(gòu)信息。UBE2L3與其他E2酶的區(qū)別在于它具有特定的結(jié)構(gòu)特征,它包含一個(gè)高度保守的UBC結(jié)構(gòu)域,這是E2酶家族的標(biāo)志。
使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割時(shí),為保證高純度和高活性,需要考慮以下關(guān)鍵因素:1.**特異性切割位點(diǎn)**:確保融合蛋白中包含PreScissionProtease特異性識(shí)別的序列,以實(shí)現(xiàn)精確切割。2.**酶與底物的比例**:適當(dāng)比例的酶量對(duì)于高效切割至關(guān)重要,過多或過少的酶都可能影響切割效率和純度。3.**反應(yīng)條件**:包括溫度、pH和反應(yīng)時(shí)間等,這些條件需要優(yōu)化以確保酶的活性和選擇性。通常,PreScissionProtease在4°C下進(jìn)行酶切。4.**緩沖液兼容性**:使用與PreScissionProtease兼容的緩沖液,避免使用可能抑制酶活性的離子或化學(xué)物質(zhì)。5.**蛋白濃度**:確保融合蛋白有足夠的濃度,以提高切割效率和減少樣品損失。6.**酶切后的分離**:切割后,需要有效分離目的蛋白和切割下來的標(biāo)簽,通常利用親和層析等方法。7.**避免蛋白降解**:在實(shí)驗(yàn)過程中添加蛋白酶抑制劑,以防止蛋白降解酶對(duì)目的蛋白的降解。8.**避免蛋白質(zhì)聚集**:在切割過程中,應(yīng)避免條件導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集或沉淀,這可能會(huì)影響純度和活性。9.**避免氧化**:在蛋白質(zhì)處理過程中,添加抗氧化劑如DTT或TCEP,以防止半胱氨酸殘基的氧化。10.**清潔的實(shí)驗(yàn)環(huán)境**:確保實(shí)驗(yàn)器材和環(huán)境的清潔,避免微生物污染和核酸污染。泛素化蛋白隨后被靶向到26S蛋白酶體進(jìn)行降解,或出現(xiàn)蛋白位置或活性變化。T7高產(chǎn)量RNA轉(zhuǎn)錄試劑盒
在目標(biāo)蛋白的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽。有助于通過親和層析進(jìn)行蛋白純化,而Avi標(biāo)簽則可以用于生物素。Recombinant Mouse IL-19
重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應(yīng)用中提高藥物穩(wěn)定性和靶向性的機(jī)制主要包括以下幾點(diǎn):1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩(wěn)定性**:rHSA作為載體,可以保護(hù)藥物分子不受體內(nèi)酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩(wěn)定性。例如,F(xiàn)GF21與HSA融合后,其體外穩(wěn)定性提升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩(wěn)定性增加。3.**改善藥代動(dòng)力學(xué)**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動(dòng)力學(xué)特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內(nèi)的濃度和療效。4.**增強(qiáng)靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學(xué)特性,如與特定受體的結(jié)合,增強(qiáng)藥物對(duì)特定組織或細(xì)胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結(jié)合,實(shí)現(xiàn)對(duì)瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內(nèi)源性蛋白質(zhì),具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應(yīng),提高藥物的安全性和耐受性。Recombinant Mouse IL-19