Recombinant Biotinylated Human DLL4 Protein

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-09-22

確保重組EGFP(增強(qiáng)型綠色熒光蛋白)在實(shí)驗(yàn)中的穩(wěn)定性和活性,可以采取以下措施:1.**適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件**:重組EGFP通常以凍干粉形式提供,應(yīng)在-20°C至-80°C的低溫條件下儲(chǔ)存,以保持其穩(wěn)定性。避免反復(fù)凍融,因?yàn)檫@可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞和活性的喪失。2.**正確的復(fù)溶方法**:在無(wú)菌條件下,使用推薦的溶劑(通常是無(wú)菌去離子水或適當(dāng)?shù)木彌_液)復(fù)溶EGFP,并避免使用含有蛋白酶或氧化劑的溶液。3.**避免光照**:EGFP對(duì)光照敏感,尤其是在紫外和藍(lán)光下。在處理和儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)避光,使用遮光容器或在低光照條件下操作。4.**使用保護(hù)劑**:在某些情況下,添加蛋白穩(wěn)定劑(如甘油、蔗糖或BSA)可以提高EGFP的穩(wěn)定性。5.**避免極端pH**:EGFP的活性和穩(wěn)定性可能受到pH值的影響。在實(shí)驗(yàn)中使用接近其等電點(diǎn)pH值的緩沖系統(tǒng),通常是中性或略偏堿性的條件。6.**控制溫度**:避免將EGFP暴露在極端溫度下,尤其是在高溫條件下,因?yàn)檫@可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。7.**避免物理剪切力**:在操作過(guò)程中,避免劇烈攪拌或超聲處理,因?yàn)檫@些可能會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞。在目標(biāo)蛋白的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽。有助于通過(guò)親和層析進(jìn)行蛋白純化,而Avi標(biāo)簽則可以用于生物素。Recombinant Biotinylated Human DLL4 Protein,His-Avi Tag

Recombinant Biotinylated Human DLL4 Protein,His-Avi Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

PreScissionProtease(PSP)在去除融合蛋白標(biāo)簽時(shí),對(duì)目的蛋白的純度和活性的影響通常是積極的,具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**小化污染**:由于PSP具有高度的特異性,它在特定的肽鍵處切割,從而減少了非特異性切割可能導(dǎo)致的蛋白質(zhì)片段,這有助于保持目的蛋白的純度。2.**減少蛋白質(zhì)修飾**:PSP的特異性切割有助于避免在切割過(guò)程中對(duì)目的蛋白引入額外的修飾,如磷酸化或糖基化,這些修飾可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性。3.**保持活性**:如果融合蛋白標(biāo)簽的設(shè)計(jì)和切割位點(diǎn)選擇得當(dāng),PSP切割后的目的蛋白通常能夠保持其原有的生物活性。切割位點(diǎn)通常位于標(biāo)簽和目的蛋白之間,這樣切割后不會(huì)在目的蛋白上留下額外的氨基酸,從而減少了對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響。4.**提高純度**:PSP切割后,可以通過(guò)親和層析等方法將標(biāo)簽、PSP以及未切割的融合蛋白分離,從而獲得高純度的目的蛋白。5.**便于后續(xù)分析**:去除標(biāo)簽后的目的蛋白更易于進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜分析、晶體學(xué)研究或其他生物化學(xué)分析,因?yàn)槿コ丝赡芨蓴_分析的標(biāo)簽部分。6.**穩(wěn)定性**:在某些情況下,融合蛋白的標(biāo)簽可能有助于穩(wěn)定目的蛋白的構(gòu)象,因此在去除標(biāo)簽后,需要適當(dāng)處理以維持目的蛋白的穩(wěn)定性。Recombinant Human CD48/SLAMF2 Protein,hFc Tag利用牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的連接原理,可以在無(wú)需DNA連接酶的情況下,快速高效地連接DNA片段,實(shí)現(xiàn)克隆。

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EndoS糖苷內(nèi)切酶S在抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)研究中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在糖鏈定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)上。通過(guò)上海藥物所的研究,開(kāi)發(fā)了一種新穎的糖鏈定點(diǎn)ADC制備策略,利用EndoS2這種糖苷內(nèi)切酶,可以將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點(diǎn)連接到抗體的糖基化位點(diǎn),實(shí)現(xiàn)了糖鏈定點(diǎn)ADC化合物的制備。定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)相比傳統(tǒng)的隨機(jī)偶聯(lián)具有更好的方法指數(shù),能夠提高ADC的均一性和穩(wěn)定性,是當(dāng)前ADC領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。在抗體的Fc結(jié)構(gòu)域N297位,這是一個(gè)保守的糖基化位點(diǎn),通過(guò)在該位點(diǎn)引入細(xì)胞物質(zhì),可以形成具有優(yōu)勢(shì)的糖鏈定點(diǎn)ADC化合物(glycosite-specificADCs,gsADCs)。此外,EndoS2對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,能夠高效獲得功能修飾的糖工程抗體,并且可以用于抗體的內(nèi)吞成像研究及糖鏈延伸等功能化研究。研究人員通過(guò)這種“一步”制備策略得到的糖鏈定點(diǎn)ADC化合物,在結(jié)構(gòu)均一性、親水性、體外穩(wěn)定性以及體外活性方面表現(xiàn)良好,并且在體內(nèi)瘤抑制活性方面,相比陽(yáng)性對(duì)照ADC化合物,在低載藥量的情況下具有更強(qiáng)的抑制效果。EndoS酶的這些應(yīng)用,不僅展示了其在簡(jiǎn)化ADC制備流程中的潛力,還有助于推動(dòng)定點(diǎn)ADC藥物的深入發(fā)展,為未來(lái)的生物藥物開(kāi)發(fā)提供了新的思路和方法。

通過(guò)SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)和Westernblot(西方印跡)可以有效地檢測(cè)帶有His標(biāo)簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進(jìn)行這些檢測(cè)的步驟:###SDS-PAGE步驟:1.**樣品準(zhǔn)備**:-將重組泛素蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,通常含有還原劑(如DTT或β-巰基乙醇)以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì)。2.**凝膠準(zhǔn)備**:-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度(例如,12%或15%凝膠用于檢測(cè)20-100kDa的蛋白質(zhì))。3.**上樣**:-將變性后的樣品加入到凝膠的相應(yīng)孔中,同時(shí)加入分子量標(biāo)記物作為參照。4.**電泳**:-在恒定電壓或恒定電流下進(jìn)行電泳,直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**:-使用考馬斯亮藍(lán)或其他蛋白質(zhì)染色劑對(duì)凝膠進(jìn)行染色,以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**:-通過(guò)比較樣品條帶與分子量標(biāo)記物,評(píng)估蛋白質(zhì)的分子量和純度。###Westernblot步驟:1.**轉(zhuǎn)膜**:-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**:-使用封閉液(如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液)封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分,以減少非特異性結(jié)合。3.**一抗孵育**:-使用特異性識(shí)別His標(biāo)簽的抗體(一抗)與膜上的蛋白質(zhì)孵育,通常在4°C過(guò)夜。盡管Ultra-Long Master Mix設(shè)計(jì)用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增,但在某些情況下,可能出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增,需要通過(guò)優(yōu)化引物。

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重組人血清白蛋白(rHSA)是一種重要的蛋白質(zhì),廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。植物表達(dá)的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)重組人血清白蛋白(rHSA)具有多項(xiàng)特點(diǎn)和科研應(yīng)用價(jià)值:1.**高純度和安全性**:植物源重組人血清白蛋白(rHSA)通過(guò)基因工程技術(shù)在植物如水稻中表達(dá),避免了動(dòng)物源成分和血源性的病毒污染的風(fēng)險(xiǎn),提供了一種更安全、更純凈的蛋白質(zhì)來(lái)源。2.**批次穩(wěn)定性**:與來(lái)源于動(dòng)物的血清白蛋白相比,植物表達(dá)的rHSA提供了更高的批次間一致性和穩(wěn)定性,這對(duì)于科研和工業(yè)應(yīng)用中的重復(fù)性和可靠性至關(guān)重要。3.**多功能性**:rHSA在細(xì)胞培養(yǎng)中可以作為重要的添加成分,有助于細(xì)胞生長(zhǎng)和維持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性。它還可以作為藥物載體,疫苗保護(hù)劑、細(xì)胞凍存保護(hù)劑和醫(yī)療器械包埋劑等。4.**生物相容性**:由于rHSA的化學(xué)性質(zhì)與天然HSA非常接近,它在生物醫(yī)藥生產(chǎn)中具有很高的生物相容性,可以用于多種藥物的配方和醫(yī)療設(shè)備。5.**科研應(yīng)用**:rHSA在科研中可用于細(xì)胞培養(yǎng)、藥物載體研究、疫苗開(kāi)發(fā)、組織工程和再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。6.**生產(chǎn)規(guī)模**:植物表達(dá)系統(tǒng)具有大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的潛力,這對(duì)于滿足全球?qū)HSA日益增長(zhǎng)的需求至關(guān)重要。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I可以用于PCR產(chǎn)物的克隆,通過(guò)其識(shí)別序列在引物設(shè)計(jì)中引入,實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增后的DNA片段連接 。Recombinant Human Azurocidin/CAP37/AZU1/HBP Protein,His Tag

去泛素化酶可以去除泛素化標(biāo)記,這一步驟是泛素化過(guò)程的逆轉(zhuǎn)過(guò)程,它允許細(xì)胞對(duì)泛素化事件進(jìn)行精細(xì)調(diào)控。Recombinant Biotinylated Human DLL4 Protein,His-Avi Tag

IdeSProtease的分子改造技術(shù)主要通過(guò)以下幾個(gè)方面提高其穩(wěn)定性和比活性:1.**定向進(jìn)化**:利用定向進(jìn)化方法,通過(guò)多輪的突變和篩選,獲得具有改善特性的酶變體。定向進(jìn)化不依賴于大規(guī)模突變文庫(kù)的構(gòu)建,而是通過(guò)定點(diǎn)突變操作,顯著提高酶分子的穩(wěn)定性。2.**半理性設(shè)計(jì)與理性設(shè)計(jì)**:結(jié)合半理性設(shè)計(jì)和理性設(shè)計(jì)的方法,通過(guò)計(jì)算模擬和結(jié)構(gòu)分析,對(duì)酶的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化,以提高其在各種環(huán)境條件下的穩(wěn)定性。3.**糖基化修飾**:作為一種新的酶分子穩(wěn)定性改造技術(shù),糖基化可以提高酶的穩(wěn)定性,防止酶在逆境中的失活,從而提高其在實(shí)際應(yīng)用中的催化活性。4.**消除蛋白質(zhì)中的不穩(wěn)定性弱點(diǎn)**:通過(guò)分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的穩(wěn)定性弱點(diǎn),進(jìn)行定點(diǎn)突變,以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的整體穩(wěn)定性。5.**提高比活性**:通過(guò)分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的濃度下就能有效地催化反應(yīng),從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對(duì)小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。

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