EndoH糖苷內(nèi)切酶H(EndoH)在實驗中通常用于分析以下類型的糖鏈:1.**高甘露糖型糖鏈**:EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**某些雜合型糖鏈**:EndoH也能對某些雜合型寡聚糖的殼二糖結(jié)構(gòu)進行切割,去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖。3.**N-連接糖鏈**:EndoH主要用于去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖,這有助于研究糖鏈結(jié)構(gòu)和糖基化模式。4.**抗體糖型分析**:在IgG中,F(xiàn)c區(qū)Asn297處的保守N-連接糖對其活性至關(guān)重要,EndoH可用于分析這些糖鏈。5.**糖蛋白的糖基化模式**:EndoH有助于分析糖蛋白的糖基化位點、糖基化程度以及糖鏈的具體結(jié)構(gòu)。6.**糖鏈分析和結(jié)構(gòu)表征**:在糖鏈分析的主要策略中,EndoH作為高效、準確、穩(wěn)定的去糖基化方法,有助于從糖蛋白上游離糖鏈,然后進行詳細的分析表征。EndoH的使用可以為研究者提供關(guān)于糖蛋白糖基化模式的重要信息,尤其是在抗體藥物研究和開發(fā)中,對于理解糖鏈如何影響藥物的活性、穩(wěn)定性和免疫原性具有重要意義。
PNGaseF(肽-N-糖苷酶F,Peptide-N-glycosidaseF),也稱為N-糖酰胺酶F,是一種用于糖蛋白研究的酶,它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關(guān)鍵特性和應(yīng)用:1.**作用機制**:PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈,釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應(yīng)用領(lǐng)域**:PNGaseF在糖生物學和蛋白質(zhì)組學研究中非常重要,用于分析糖蛋白的糖基化模式和結(jié)構(gòu)。3.**酶的來源**:PNGaseF開始是從大腸桿菌(Escherichiacoli)中分離出來的,現(xiàn)在也可以通過重組DNA技術(shù)在其他宿主細胞中表達。4.**酶的純度和活性**:商業(yè)化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性,確保了在實驗中的高效性和可重復(fù)性。5.**使用條件**:PNGaseF在溫和的條件下工作,通常在pH7.5至9.0之間,溫度在37°C左右。6.**穩(wěn)定性**:PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存,以保持其活性。在適當?shù)臈l件下,該酶可以保持穩(wěn)定和活躍。7.**樣品準備**:在使用PNGaseF之前,糖蛋白樣品需要適當準備,可能包括純化和緩沖液交換,以確保反應(yīng)條件的一致性。Recombinant Human M-CSF R/CSF1R/CD115 Protein,His Tag利用His標簽通過親和層析從細胞裂解物中純化目標蛋白,然后可能通過離子交換層析、等方法進一步提純。
重組增強型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點和應(yīng)用:1.**高熒光強度**:EGFP比野生型GFP具有更強的熒光,這使得它在成像和檢測時更為敏感和有效。2.**改進的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報告基因用于基因表達分析,也可以作為融合標簽用于蛋白質(zhì)定位和動態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學和分子生物學實驗。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長時間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個氨基酸構(gòu)成。
NLS-Cas9-EGFPNuclease是一種融合蛋白,由Cas9核酸酶、核定位信號(NLS)和EGFP(綠色熒光蛋白)組成。這種融合蛋白的特點和科研應(yīng)用如下:**特點:**1.**無DNA污染**:系統(tǒng)不添加外部DNA,降低了外源DNA污染的風險。2.**高切割效率**:NLS確保Cas9蛋白能夠高效地進入細胞核,從而提高DNA切割效率。3.**低脫靶效應(yīng)**:由于Cas9核酸酶的瞬時表達,減少了在非目標位點切割的可能性。4.**節(jié)省時間**:與需要轉(zhuǎn)錄和翻譯的mRNA或質(zhì)粒系統(tǒng)相比,NLS-Cas9-EGFPNuclease可以直接進入細胞核,無需等待轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。5.**EGFP標簽**:EGFP作為報告基因,可用于追蹤或分選轉(zhuǎn)染細胞,便于通過熒光激起細胞分選(FACS)富集所需基因組編輯的細胞群,減少單細胞克隆和基因分型的勞動和成本。**科研應(yīng)用:**1.**體外DNA切割篩選**:可以用于篩選高效和特異性靶向的gRNA,通過體外DNA切割實驗來驗證gRNA的效率和特異性。2.**體內(nèi)基因編輯**:與特定的gRNA結(jié)合后,可以通過電穿孔或注射的方式進行體內(nèi)基因編輯。3.**細胞追蹤和分選**:利用EGFP熒光標記,可以追蹤轉(zhuǎn)染細胞并進行分選,這對于研究基因編輯后的細胞群體特別有用。
EndoS,即糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學研究中有著重要應(yīng)用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點:1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進行切割。2.**應(yīng)用**:在制備糖鏈定點ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點,提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**:EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物,實現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求,可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒有活性。5.**產(chǎn)品形式**:EndoS通常以帶有His標簽的形式存在,便于從反應(yīng)中去除,這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時。
Phusion DNA Polymerase 應(yīng)在后面加入反應(yīng)體系中,以避免其3'-5'外切酶活性降解引物。Recombinant Rat IL-10
Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒通過以下方式實現(xiàn)高靈敏性:1.**熒光探針技術(shù)**:試劑盒采用熒光標記的DNA探針,這種探針在沒有Benzonase核酸酶的樣品中穩(wěn)定存在且不產(chǎn)生熒光信號。當樣品中含有核酸酶殘留時,核酸酶會切割熒光標記的DNA探針,導致熒光信號的增強。這種變化可以用來定量分析Benzonase的殘留量,實現(xiàn)高靈敏度檢測。2.**熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)**:該技術(shù)利用了供體(Donor)和受體(Acceptor)熒光基團間的相互作用。在未切割狀態(tài)下,供體的熒光被受體淬滅,而一旦DNA探針被Benzonase切割,供體熒光基團與受體分離,熒光信號增強,從而實現(xiàn)高靈敏度的檢測。3.**優(yōu)化的底物探針**:試劑盒中的Benzonase底物是一種合成的DNA寡核苷酸探針,其一端具有VIC熒光基團,另一端具有BHQ1淬滅基團。這種設(shè)計使得在底物被切割后,VIC熒光不再被BHQ1淬滅,從而可以非常靈敏地檢測到Benzonase核酸酶活性。4.**高靈敏度的檢測范圍**:試劑盒能夠檢測到低達約0.002U(約0.003ng)的Benzonase或BeyoZonase,樣品中的Benzonase濃度約為0.0002U/μl或0.3pg/μl,這遠低于常規(guī)同類產(chǎn)品的檢測限。Recombinant Rat IL-10