Recombinant Mouse CD19 Protein

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-17

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn):1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門n5轉(zhuǎn)座酶,能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù)、高通量測(cè)序建庫、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。5.**操作簡(jiǎn)便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,從細(xì)胞到二代測(cè)序文庫的轉(zhuǎn)化過程需9小時(shí)。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低。通過SDS-PAGE、Western blot、質(zhì)譜等方法驗(yàn)證蛋白的純度和分子量。通過活性測(cè)試評(píng)估蛋白的生物活性。Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag

Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

Blood Direct PCR Master Mix (2×)的組分通常包括以下幾類:高保真DNA聚合酶:例如,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,這是一種熱穩(wěn)定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,并與Sso7d結(jié)構(gòu)域融合以增強(qiáng)過程性3940。dNTPs:提供DNA合成所需的四種脫氧核苷三磷酸。優(yōu)化的緩沖體系:包含適合于血液樣本PCR擴(kuò)增的pH和離子強(qiáng)度,以及能夠抵抗血液樣本中抑制劑的特殊成分。穩(wěn)定劑:保證預(yù)混合溶液在儲(chǔ)存和使用過程中的穩(wěn)定性??挂种苿┏煞郑阂恍〣lood Direct PCR Master Mix含有能夠抵抗血液樣本中可能存在的PCR抑制劑的成分??蛇x的染料:某些產(chǎn)品可能含有用于電泳的染料,允許PCR產(chǎn)物直接上樣進(jìn)行電泳分析,無需額外的上樣緩沖液。其他可選組分:根據(jù)需要,可能包括MgCl2、EDTA、DMSO等,用于優(yōu)化特定樣本或反應(yīng)條件42。Recombinant Rat MIF利用牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的連接原理,可以在無需DNA連接酶的情況下,快速高效地連接DNA片段,實(shí)現(xiàn)克隆。

Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,屬于RecA/Rad51家族的同源體。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復(fù)以及復(fù)制叉重新啟動(dòng)的過程中扮演著重要角色。T4UvsX重組酶能夠與其他DNA結(jié)合蛋白或輔助因子協(xié)同作用,與單鏈DNA形成核酸蛋白復(fù)合物。該復(fù)合物通過尋找與目標(biāo)DNA互補(bǔ)的區(qū)域進(jìn)行雜交,以完成鏈置換反應(yīng),且此酶本身不具有核酸酶活性。產(chǎn)品應(yīng)用方面,T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)。它在實(shí)驗(yàn)中與T4UvsY重組酶、BsuDNA聚合酶(大片段)、T4基因32蛋白(gp32)等組分一同使用,以優(yōu)化RPA擴(kuò)增反應(yīng)。T4UvsX重組酶的保存條件為-20℃,可保存3年,或者-20℃儲(chǔ)存有效期為2年,避免反復(fù)凍融。其儲(chǔ)存液通常包含Tris-HCl、KCl、DTT、EDTA和甘油等成分,以保持酶的穩(wěn)定性和活性。熱失活處理為60℃孵育10分鐘。在使用T4UvsX重組酶時(shí),需要注意其保存液中甘油含量較高,建議單獨(dú)分裝保存,并且在操作時(shí)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套,以確保安全。此外,該產(chǎn)品供科研使用,不應(yīng)用于臨床診斷。

PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行電泳分析通常涉及以下步驟:PCR擴(kuò)增:首先使用PCR Master Mix和特定的引物對(duì)目標(biāo)DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物的準(zhǔn)備:如果使用的是含有預(yù)混凝膠加載染料的PCR Master Mix(如某些Blood Direct PCR Master Mix),則PCR產(chǎn)物在擴(kuò)增后已經(jīng)含有了適合電泳的染料。如果沒有使用含染料的Master Mix,則需要在PCR反應(yīng)完成后向產(chǎn)物中添加適量的凝膠加載染料。電泳槽的準(zhǔn)備:清潔電泳槽,確保沒有灰塵或殘留物。安裝電泳板和梳子,注意密封以防緩沖液泄漏。灌注緩沖液:向電泳槽中灌注適量的電泳緩沖液,常用的緩沖液有1X TAE或1X TBE。PCR產(chǎn)物的加載:將PCR產(chǎn)物輕輕混合均勻,避免氣泡的產(chǎn)生。使用移液槍或微量移液管將PCR產(chǎn)物加入到凝膠孔中。如果PCR Master Mix中已含有染料,通常不需要額外添加。電泳條件的設(shè)置:根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和凝膠的濃度選擇合適的電壓和時(shí)間進(jìn)行電泳。例如,較小的DNA片段可能需要較高的電壓,而較大的片段則可能需要較低的電壓和更長的時(shí)間。FnCas12a特異性識(shí)別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA(dsDNA)靶標(biāo),其PAM序列為5'-TTN-3',與Cas9的PAM序列不同。

Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒,它通過逆轉(zhuǎn)錄過程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的組分,以確保高效和準(zhǔn)確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會(huì)發(fā)生RNA的降解,從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長cDNA,特別是從較長的模板(可達(dá)13kb)。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉(zhuǎn)錄酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過點(diǎn)突變完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,這是一種重組蛋白,可有效保護(hù)RNA在高達(dá)55°C的溫度下不受RNases的降解。-緩沖液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應(yīng)。-有時(shí)還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟r(shí)PCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大。此外,可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標(biāo)記的核苷酸,以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實(shí)驗(yàn)中作為探針使用。將含有重組質(zhì)粒的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞中,通常是大腸桿菌或其他合適的細(xì)胞系。Recombinant Cynomolgus DDT Protein,His Tag

在MAGE-A3基因序列的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽序列。His標(biāo)簽有助于通過金屬螯合親和層析進(jìn)行蛋白純化。Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag

5'DNA腺苷酰化試劑盒通過酶學(xué)方法高效地將單鏈DNA(ssDNA)5'端腺苷?;?,通常轉(zhuǎn)化效率可達(dá)95%以上。以下是實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵步驟和特點(diǎn):1.**單步反應(yīng)**:與傳統(tǒng)化學(xué)方法相比,該試劑盒可以在一個(gè)簡(jiǎn)單的步驟中完成5'端磷酸化修飾的單鏈DNA或RNA的腺苷?;揎棧瑹o需多步驟操作或純化。2.**高效率**:試劑盒通常能將95%以上的5'端磷酸化的DNA(pDNA)轉(zhuǎn)化成腺苷酰化DNA(AppDNA),從而提高產(chǎn)量并避免膠回收提純步驟。3.**高溫孵育**:在65℃的高溫下進(jìn)行反應(yīng),有助于避免DNA或RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)腺苷?;磻?yīng)的干擾。4.**酶的來源**:試劑盒中的腺苷?;?Adenylase)通常來源于嗜熱古細(xì)菌,在大腸桿菌中表達(dá)獲得,保證反應(yīng)的高效性。5.**操作簡(jiǎn)便**:使用MthRNA連接酶、ATP和5'-磷酸化的單鏈DNA進(jìn)行反應(yīng),操作簡(jiǎn)單,且腺苷化產(chǎn)物通常不需要進(jìn)行電泳切膠回收,可以直接通過乙醇沉淀進(jìn)行進(jìn)一步濃縮后用于后續(xù)的連接反應(yīng)。6.**失活酶**:反應(yīng)完成后推薦在85℃孵育5分鐘以失活A(yù)denylase,防止去腺苷?;F(xiàn)象,確保腺苷?;嚷什幌陆?。

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