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抑肽酶(Aprotinin),一種絲氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。本研究探討了利用大腸桿菌(E. coli)表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組抑肽酶的方法,及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢(shì)。引言抑肽酶,又稱胰蛋白酶抑制劑,是一種小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性。在生物制藥、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)研究中,抑肽酶的使用對(duì)于防止非特異性蛋白水解至關(guān)重要。傳統(tǒng)的抑肽酶主要來(lái)源于動(dòng)物,如牛肺,但存在外源病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組抑肽酶的生產(chǎn),可以提供一種無(wú)動(dòng)物源、高純度、質(zhì)量穩(wěn)定的替代品。材料與方法基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建:人源Ⅲ型膠原蛋白基因被克隆并構(gòu)建到適合大腸桿菌表達(dá)的質(zhì)粒載體中。大腸桿菌表達(dá)菌株的構(gòu)建:通過(guò)轉(zhuǎn)化,將構(gòu)建好的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌宿主菌中,構(gòu)建表達(dá)菌株。發(fā)酵培養(yǎng):利用發(fā)酵罐進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng),以提升重組抑肽酶的產(chǎn)量。蛋白純化:通過(guò)多次柱純化獲得高純度的重組抑肽酶。常用的跨膜蛋白表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)等。Recombinant Human MCP-4/CCL13
N-糖苷酶F(PNGaseF)是一種酰胺水解酶,經(jīng)過(guò)和平空間站伊麗莎菌克隆,主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。酵母重組表達(dá)N-糖苷酶F(比活性:750000U/mL),可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGaseF的切割位點(diǎn)為糖蛋白內(nèi)側(cè)N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵,同時(shí)將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。本產(chǎn)品帶his標(biāo)簽,常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白完全去糖基化。另外,我司還提供其他類型的糖苷酶,包括酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F,糖苷內(nèi)切酶H,糖苷內(nèi)切酶S。產(chǎn)品信息產(chǎn)品性質(zhì)中文別名(Chinesesynonym)N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶F英文別名(Englishsynonym)PNGaseF來(lái)源(Source)酵母重組表達(dá)分子量(Molecularweight)36kDa比活性(Specificactivity)750000U/mL緩沖液組分(Buffer)20mMTris-HClpH7.5,50mMNaCl,5mMEDTA,50%GlycerolRecombinant Human PBK/TOPK Protein,His Tag泛素-蛋白酶體途徑在調(diào)控多種細(xì)胞過(guò)程中的關(guān)鍵作用,靶向這一途徑的藥物開(kāi)發(fā)已成為預(yù)防某些疾病的新策略。
抑肽酶(Aprotinin),又稱為抑蛋白酶肽,是一種競(jìng)爭(zhēng)性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,可與絲氨酸蛋白酶形成穩(wěn)定復(fù)合物并阻斷酶的活性位點(diǎn),這種結(jié)合是可逆的,大多數(shù)的抑肽酶-蛋白酶復(fù)合物在極端的pH<3.0的條件下解除結(jié)合。抑肽酶抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶,不能抑制Xa因子和凝血酶。從結(jié)構(gòu)上來(lái)說(shuō),抑肽酶是一種來(lái)自牛肺的單體球狀蛋白,由58個(gè)氨基酸組成并排列在具有三個(gè)交聯(lián)二硫鍵的單個(gè)多肽鏈中。重組抑肽酶采用大腸桿菌表達(dá),在GMP法規(guī)下生產(chǎn),不含任何動(dòng)物源成分,無(wú)動(dòng)物源性的病毒污染,氨基酸序列與來(lái)源于牛肺的抑肽酶完全一致,具有與動(dòng)物源性抑肽酶相同的酶學(xué)性質(zhì),可替代動(dòng)物源性抑肽酶用于各種生物技術(shù)過(guò)程中,如:重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性;細(xì)胞培養(yǎng)等。
Dabigatranetexilatemesylate,又稱甲磺酸達(dá)比加群酯,是可口服的凝血酶抑制劑,是一種抗凝藥,通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝血酶的纖維蛋白特異結(jié)合位點(diǎn),阻礙纖維蛋白生成,從而抑制血栓的形成。產(chǎn)品信息英文別名(EnglishSynonym)Dabigatranetexilatemesylate,Pradaxa,BIBR1048MS,Dabigatranetexilatemethanesulfonate中文名稱(ChineseName)甲磺酸達(dá)比加群酯,達(dá)比加群酯甲磺酸鹽靶點(diǎn)(Target)Thrombin通路(Pathway)Protease/MetabolicEnzyme--ThrombinCAS號(hào)(CASNO.)872728-81-9分子式(Formula)C35H45N7O8S分子量(MolecularWeight)723.84外觀(Appearance)粉末純度(Purity)≥98%溶解性(Solubility)溶于DMSO運(yùn)輸和保存方法-25~-15℃保存,有效期3年。使用方法【數(shù)據(jù)來(lái)自于公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn),供參考,具體使用濃度請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn),并根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件(如實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?xì)胞種類,培養(yǎng)特性等)進(jìn)行摸索和優(yōu)化?!縿?dòng)物實(shí)驗(yàn)(體內(nèi)實(shí)驗(yàn))在體內(nèi),口服dabigatranetexilate在大10-50mg/kg)和恒河猴(1-5mg/kg)時(shí)間劑量依賴性地表現(xiàn)出抗凝效果。跨膜蛋白在宿主細(xì)胞中的表達(dá)水平通常有點(diǎn)低,研發(fā)困難,對(duì)蛋白表達(dá)生產(chǎn)平臺(tái)技術(shù)要求極高。
Cas9核酸酶是一種引導(dǎo)RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶,可以催化雙鏈DNA的裂解。這種靶向核酸酶是一種高精度的基因組編輯的有力工具。Cas9蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA(gRNA)成分形成一個(gè)非常穩(wěn)定的核糖白(RNP)復(fù)合物。Cas9RNP復(fù)合物可以在進(jìn)入細(xì)胞后,通過(guò)添加一個(gè)N端核定位信號(hào)(NLS),增加入核效率。YEASEN開(kāi)發(fā)的NLS-Cas9核酸酶在蛋白的N端包含一個(gè)核定位序列(NLS),以增加入核切割效率。產(chǎn)品特點(diǎn)如下:無(wú)DNA:沒(méi)有外部DNA添加。安全性好:野生型Cas9蛋白,無(wú)標(biāo)簽。可應(yīng)用于:通過(guò)體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。產(chǎn)品信息貨號(hào)11366ES60/11366ES76規(guī)格100μg/500μg來(lái)源重組Cas9來(lái)源于大腸桿菌物種化膿性鏈球菌標(biāo)簽無(wú)分子量160KDa濃度10mg/mL(50μg);10mg/mL(100μg)透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid,簡(jiǎn)稱HA)是一種存在于人體和動(dòng)物組織中的天然高分子多糖,稱為糖醛酸或玻尿酸。Recombinant Human EG-VEGF
α-凝血酶是研究血液凝固機(jī)制和血栓性疾病發(fā)展的主要靶點(diǎn)。重組α-凝血酶用于體外測(cè)定。Recombinant Human MCP-4/CCL13
產(chǎn)品描述纖維蛋白原(Fibrinogen,F(xiàn)g),即凝血因子I,分子量約340kDa,由α、β、γ三對(duì)不同多肽鏈組成,多肽鏈間以二硫鍵相連。α鏈分子量63.5kDa,β鏈分子量56kDa,γ鏈分子量47kDa,纖維蛋白原約含4%碳水化合物。纖維蛋白原參與凝血的原理:在凝血酶作用下,α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽,生成纖維蛋白單體。在此過(guò)程中,由于釋放了酸性多肽,負(fù)電性降低,單體易于聚合成纖維蛋白多聚體,但此時(shí)單體之間借氫鍵與疏水鍵相連,尚可溶于稀酸和尿素溶液中。進(jìn)一步在Ca2+與活化的ⅩⅢ因子作用下,單體之間以共價(jià)鍵相連,則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊,完成凝血過(guò)程。來(lái)源于不同物種(如來(lái)源于牛、貓、狗、豚鼠、人、綿羊、小鼠和大鼠等)的纖維蛋白原具有相似的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。因此,一般來(lái)源于一種哺乳動(dòng)物的纖維蛋白原可與其他來(lái)源的凝血酶交叉反應(yīng),相反地來(lái)自一種哺乳動(dòng)物蛋白的凝血酶液也可注入多種動(dòng)物,發(fā)生凝血反應(yīng)。Recombinant Human MCP-4/CCL13