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Cas9核酸酶是一種引導(dǎo)RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶,可以催化雙鏈DNA的裂解。這種靶向核酸酶是一種高精度的基因組編輯的有力工具。Cas9蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA(gRNA)成分形成一個(gè)非常穩(wěn)定的核糖白(RNP)復(fù)合物。Cas9RNP復(fù)合物可以在進(jìn)入細(xì)胞后,通過添加一個(gè)N端核定位信號(NLS),增加入核效率。YEASEN開發(fā)的NLS-Cas9核酸酶在蛋白的N端包含一個(gè)核定位序列(NLS),以增加入核切割效率。產(chǎn)品特點(diǎn)如下:無DNA:沒有外部DNA添加。安全性好:野生型Cas9蛋白,無標(biāo)簽??蓱?yīng)用于:通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。產(chǎn)品信息貨號11366ES60/11366ES76規(guī)格100μg/500μg來源重組Cas9來源于大腸桿菌物種化膿性鏈球菌標(biāo)簽無分子量160KDa濃度10mg/mL(50μg);10mg/mL(100μg)透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid,簡稱HA)是一種存在于人體和動(dòng)物組織中的天然高分子多糖,稱為糖醛酸或玻尿酸。Recombinant Human SIRP alpha/CD172a,His Tag
泛素化是通過三個(gè)酶促步驟實(shí)現(xiàn)的。在ATP依賴的過程中,泛素酶(E1)催化與泛素形成活性硫酯鍵,然后轉(zhuǎn)移到泛素載體蛋白的活性位點(diǎn)半胱氨酸(E2)。泛素級聯(lián)對特定底物蛋白的選擇性依賴于E2結(jié)合酶(細(xì)胞中包含的相對較少)和泛素-蛋白連接酶(E3)之間的相互作用,迄今為止已經(jīng)鑒定出600多種這種酶。E3s是一個(gè)大的,多樣化的蛋白質(zhì)組,其特征是幾個(gè)確定的基序之一。這些包括HECT(與e6相關(guān)蛋白c端同源),RING(真正有趣的新基因)或U-box(沒有Zn2+結(jié)合配體的完整補(bǔ)充的修飾的RING基序)結(jié)構(gòu)域。而HECTE3s在泛素化過程中具有直接的催化作用,RING和U-boxE3s促進(jìn)蛋白質(zhì)泛素化。后兩種E3類型充當(dāng)適配器類分子。它們使E2和底物足夠接近,從而促進(jìn)底物的泛素化。雖然許多RING-typee3,如MDM2和c-Cbl,可以單獨(dú)發(fā)揮作用,但其他一些是作為更大的多蛋白復(fù)合體的組成部分,如后期促進(jìn)復(fù)合體。綜上所述,這些多面的特性和相互作用使E3s能夠利用泛素-蛋白酶體系統(tǒng),在真核生物的所有細(xì)胞中提供一種強(qiáng)大而具體的蛋白質(zhì)機(jī)制。該篩選了11種常用E2結(jié)合酶,可以篩選具有E3連接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.GRGDSPK透明質(zhì)酸的衍生物可以作為基因傳遞的載體,或用于疫苗佐劑,增強(qiáng)反應(yīng)。
糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。儲存條件-25~-15℃保存,有效期1年。使用方法1、變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化:1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,總反應(yīng)體積20μL;加入1-2μL的PNGase,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。2、非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化:1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL。2)加入2~5μL的PNGaseF,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時(shí)間。注意事項(xiàng)1.PNGaseF建議搭配我司提供的配套緩沖液使用,按我司說明書建議的操作量配套緩沖液足夠。如您由于使用體系造成配套緩沖液不足,可咨詢當(dāng)?shù)劁N售進(jìn)行購買
3C蛋白酶(3C Protease),也稱為3Cpro或3C樣蛋白酶(3CLpro),是一類在RNA病毒復(fù)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用的酶。它們負(fù)責(zé)切割病毒的多聚蛋白前體,從而釋放出成熟的病毒蛋白,這些蛋白對于病毒的復(fù)制和組裝至關(guān)重要。3C蛋白酶在多種病毒中都有發(fā)現(xiàn),包括冠狀病毒、小RNA病毒等。結(jié)構(gòu)與功能3C蛋白酶通常具有特定的酶切位點(diǎn),能夠識別并切割特定的氨基酸序列。例如,小RNA病毒科的3C蛋白酶識別位點(diǎn)為Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro,切割位點(diǎn)位于谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)之間,稱為Q-G位點(diǎn)4。抗病毒藥物開發(fā)3C蛋白酶因其在病毒生命周期中的關(guān)鍵作用,成為抗病毒藥物開發(fā)的重要靶點(diǎn)。通過抑制3C蛋白酶的活性,可以有效阻斷病毒的復(fù)制過程。例如,SARS-CoV-2(病毒)的3CLpro是抗冠狀病毒藥物的重要靶點(diǎn),西湖大學(xué)胡奇團(tuán)隊(duì)等合作揭示了SARS-CoV-2 3CLpro潛在耐藥機(jī)制,為解決潛在的耐藥問題提供了重要信息3。耐藥性研究隨著3CLpro抑制劑的使用,其耐藥問題也日益受到關(guān)注。研究表明,3CLpro的某些突變可能導(dǎo)致病毒對抑制劑產(chǎn)生耐藥性。透明質(zhì)酸及其衍生物由于其生物相容性和生物降解性,被用作藥物的控釋載體。
N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。儲存條件-15~-25℃保存,有效期1年。使用說明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;3)加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,總反應(yīng)體積20μL;4)加入0.2~0.5μL的PNGase,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL。2)加入0.5~1μL的PNGaseF,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時(shí)間。泛素化可以是單泛素化,也可以是多泛素化或多聚泛素化,這取決于靶蛋白上連接的泛素分子的數(shù)量和方式。IRL-1620
跨膜蛋白的多功能性使它們成為理想的藥物作用靶點(diǎn),例如四次跨膜蛋白CD20、Claudin18.2。Recombinant Human SIRP alpha/CD172a,His Tag
應(yīng)用蛋白質(zhì)糖基化分析Endo H常用于分析蛋白質(zhì)的糖基化模式。通過Endo H處理,可以移除蛋白質(zhì)上的高甘露糖型糖鏈,從而簡化糖鏈結(jié)構(gòu),便于進(jìn)一步的分析。生物制藥在生物制藥領(lǐng)域,Endo H用于改善重組蛋白藥物的糖基化質(zhì)量。通過調(diào)整培養(yǎng)條件和使用Endo H,可以優(yōu)化蛋白質(zhì)的糖鏈結(jié)構(gòu),提高藥物的療效和穩(wěn)定性。疾病研究Endo H也在疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的糖基化研究中發(fā)揮作用。例如,腫瘤細(xì)胞表面的糖鏈結(jié)構(gòu)與正常細(xì)胞不同,Endo H可用于研究這些變化及其在疾病進(jìn)展中的作用。前景展望隨著對蛋白質(zhì)糖基化重要性認(rèn)識的增加,Endo H的應(yīng)用范圍預(yù)計(jì)將進(jìn)一步擴(kuò)大。未來研究可能會(huì)集中在開發(fā)更高效、專一性的Endo H變體,以及探索其在個(gè)性化醫(yī)療和精細(xì)中的應(yīng)用。結(jié)論Endo H作為一種重要的工具酶,在糖生物學(xué)研究和蛋白質(zhì)工程中扮演著關(guān)鍵角色。深入理解其結(jié)構(gòu)和功能,將有助于推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)進(jìn)展和臨床應(yīng)用。Recombinant Human SIRP alpha/CD172a,His Tag