原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)和研究有著很大的應(yīng)用范圍。原代肝細(xì)胞(Primaryhepatocytes)是指從動(dòng)物肝臟取出后立即培養(yǎng)的肝細(xì)胞。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點(diǎn)：1.與體內(nèi)環(huán)境保持一致，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度，可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性；2.較好保留酶水平和維持了肝細(xì)胞的完整形態(tài)和肝細(xì)胞體外代謝活性，真實(shí)反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。3.隨著技術(shù)水平的不斷提高，原代培養(yǎng)的動(dòng)物和人肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究：4.探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動(dòng)力學(xué)的研究；5.評(píng)價(jià)藥物和外源性物質(zhì)對(duì)肝臟中細(xì)胞色素P450酶誘導(dǎo)作用并探討其誘導(dǎo)機(jī)制；6.預(yù)測(cè)和解釋藥物與藥物之間的相互作用；7.研究藥物的細(xì)胞毒性等。因此了解或者掌握原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)和研究的相關(guān)技術(shù)對(duì)于提升相關(guān)試驗(yàn)的成功率非常有幫助。立沃生物的原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制服務(wù)，包括細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量檢測(cè)、細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量評(píng)估等。北京獼猴原代肝細(xì)胞
原代肝細(xì)胞是簡(jiǎn)單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝臟細(xì)胞或是cancer細(xì)胞系，原代肝細(xì)胞在造模的同時(shí)不需要復(fù)雜的對(duì)細(xì)胞進(jìn)行重編程，以及誘導(dǎo)分化，可以更方便更快速的進(jìn)行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細(xì)胞能夠更準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)的真實(shí)情況，有數(shù)據(jù)表明，原代肝細(xì)胞比iPSC誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝細(xì)胞內(nèi)的堿基取代少數(shù)倍，同時(shí)這些細(xì)胞還保留了捐獻(xiàn)者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于，原代肝細(xì)胞衍生的Organoid可以提供獨(dú)特的肝毒模型，因?yàn)樵?xì)胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細(xì)胞不僅擁有捐贈(zèng)者特有的生理特性，同時(shí)也具備其他兩種肝細(xì)胞在應(yīng)對(duì)病原體時(shí)的生理反應(yīng)。深圳羅非魚(yú)原代肝細(xì)胞培養(yǎng)原代肝細(xì)胞作為體外藥物代謝研究的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在藥物代謝和毒理學(xué)研究中具有重要的意義。
貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞是酶誘導(dǎo)研究的重要模型，也是藥物代謝實(shí)驗(yàn)的重要模型。這種模型可以通過(guò)倍數(shù)變化方法來(lái)評(píng)估藥物是否為酶的誘導(dǎo)劑。具體來(lái)說(shuō)，研究人員可以使用已知的陽(yáng)性和陰性對(duì)照藥物來(lái)校準(zhǔn)體外系統(tǒng)，然后將研究藥物與細(xì)胞共孵育，測(cè)定孵育后CYP酶的mRNA表達(dá)水平倍數(shù)變化，以評(píng)估藥物是否為酶的誘導(dǎo)劑。這種方法可以幫助研究人員更好地了解藥物相互作用的機(jī)制，從而更好地指導(dǎo)臨床用藥。酶誘導(dǎo)是一種藥物相互作用的現(xiàn)象，指某些化合物能夠提高肝臟藥物代謝酶的活性，從而導(dǎo)致合用的藥物代謝速率加快，使得原藥的血藥濃度下降，進(jìn)而使其療效降低或喪失。這種現(xiàn)象在臨床上非常常見(jiàn)，因?yàn)樵S多藥物都需要通過(guò)肝臟代謝酶來(lái)進(jìn)行代謝，而酶誘導(dǎo)會(huì)影響這些代謝酶的活性，從而影響藥物的代謝。酶誘導(dǎo)的機(jī)制是通過(guò)影響肝臟細(xì)胞內(nèi)的CYP酶的表達(dá)和活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。CYP酶是肝臟細(xì)胞內(nèi)重要的藥物代謝酶之一，它能夠代謝許多藥物和毒物，從而使它們被代謝出體外。當(dāng)某些化合物進(jìn)入體內(nèi)后，它們會(huì)與CYP酶結(jié)合并使它們的特異性表達(dá)，從而使得CYP酶能夠更快地代謝藥物和毒物，使其被代謝出體外。原代肝細(xì)胞依舊是目前理想的體外模型，是藥物代謝研究的重要組成部分。
原代肝細(xì)胞是指從肝臟中直接分離出來(lái)的細(xì)胞，這些細(xì)胞具有肝臟的特定功能，如合成膽汁、代謝藥物等。然而，原代肝細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)很難保持其原有的特性，而且無(wú)法傳代。這是因?yàn)樵渭?xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)會(huì)失去其特定的細(xì)胞形態(tài)和功能，逐漸失活。 為了解決原代肝細(xì)胞無(wú)法傳代的問(wèn)題，科學(xué)家們研究出了一種新的細(xì)胞類型，即肝祖細(xì)胞。肝祖細(xì)胞是一種可以傳代的細(xì)胞，它們可以分化成多種肝細(xì)胞類型，如肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞等。這些細(xì)胞可以在體外培養(yǎng)中保持其特定的細(xì)胞形態(tài)和功能，從而成為一種重要的研究工具。 除了肝祖細(xì)胞，干細(xì)胞也被認(rèn)為是一種可以傳代的細(xì)胞類型。干細(xì)胞具有自我更新和分化成多種細(xì)胞類型的能力，包括肝細(xì)胞。然而，干細(xì)胞在分化成肝細(xì)胞時(shí)，可能會(huì)失去一些肝臟的特定功能，因此在臨床應(yīng)用中還需要進(jìn)一步研究和改進(jìn)。 原代肝細(xì)胞來(lái)自于新鮮肝臟，可以保持原有的特性和性狀，但是體外培養(yǎng)難度系數(shù)較大；干細(xì)胞培育分化較為容易，但是分化時(shí)會(huì)有特性的丟失。相信隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)，體外培育高質(zhì)量穩(wěn)定的肝細(xì)胞將不再是困擾技術(shù)人員的難題。立沃生物的原代肝細(xì)胞的分離技術(shù)門(mén)檻很高，需要特定的實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)，以及嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理和質(zhì)量控制。
解決人工肝臟合成難題，原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源。目前，常用的肝細(xì)胞源有人原代肝細(xì)胞、動(dòng)物原代肝細(xì)胞、liver cancer細(xì)胞系HepG2、HepaRG、永生化細(xì)胞以及干細(xì)胞等。其中，人原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源，因?yàn)樗鼈兙哂型暾母喂δ芎蜕硖匦?，能夠更好地模擬人體肝臟的生理狀態(tài)。但是，由于人原代肝細(xì)胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實(shí)際應(yīng)用中受到了一定的限制。 相比之下，動(dòng)物原代肝細(xì)胞則具有更好的增殖能力和更便捷的獲取方式，但是由于動(dòng)物肝臟與人肝存在一定的差異，因此其在模擬人體肝臟生理狀態(tài)方面存在一定的局限性。HepG2和HepaRG則是常用的liver cancer細(xì)胞系，它們具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在致瘤風(fēng)險(xiǎn)，因此在臨床應(yīng)用中需要謹(jǐn)慎使用。 永生化細(xì)胞則是通過(guò)基因工程技術(shù)將原代肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化為無(wú)限增殖的細(xì)胞系，如HepG2.2.15和Huh7等。這些細(xì)胞系具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在一定的局限性和風(fēng)險(xiǎn)。 綜上所述，原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源，選擇合適的肝細(xì)胞源需要綜合考慮其功能、增殖能力、安全性等因素，以期達(dá)到想要的生物人工肝效果。原代肝細(xì)胞能模擬肝臟對(duì)藥物的代謝和毒性反應(yīng)，是藥物的安全性評(píng)價(jià)和藥代動(dòng)力學(xué)研究的重要的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。湛江?shù)鼩原代肝細(xì)胞貼壁
人原代肝細(xì)胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實(shí)際應(yīng)用中受到了一定的限制。北京獼猴原代肝細(xì)胞
原代肝細(xì)胞的體外擴(kuò)增不是一件容易的事。原代肝細(xì)胞是一種非常重要的細(xì)胞類型，具有豐富的酶系和多種特異性功能，因此被大量用于生物化學(xué)、實(shí)驗(yàn)性肝損傷、藥代動(dòng)力學(xué)、毒理學(xué)和cancer等研究。然而，這些細(xì)胞在體外的存活能力非常有限，所以分離并培養(yǎng)出高活性的原代肝細(xì)胞并不是一件容易的事情。 分離高質(zhì)量的原代肝細(xì)胞，需要采用一系列復(fù)雜的技術(shù)和方法。首先，需要選擇合適的動(dòng)物模型，以獲得足夠數(shù)量的肝組織。然后，需要對(duì)肝組織進(jìn)行消化和分離，通常使用的方法包括機(jī)械分離、膠原酶消化、胰蛋白酶消化等。在分離過(guò)程中，需要注意避免對(duì)細(xì)胞的損傷，以保證細(xì)胞的活力和功能完整性。 分離出的原代肝細(xì)胞也需要按照嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行培育。原代肝細(xì)胞需要在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以提供必要的營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子。在培養(yǎng)過(guò)程中，需要注意細(xì)胞的密度、溫度、氧氣濃度、pH值等因素，以保證細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分化。此外，還需要添加適當(dāng)?shù)乃幬锖突衔?，以模擬體內(nèi)的生理環(huán)境和病理狀態(tài)，以便進(jìn)行相關(guān)研究。 分離并培養(yǎng)出高活性的原代肝細(xì)胞是進(jìn)行肝臟相關(guān)研究的關(guān)鍵步驟之一。雖然這個(gè)過(guò)程非常復(fù)雜和困難，但是通過(guò)不斷的努力和創(chuàng)新，我們相信會(huì)有更多的突破和進(jìn)展。北京獼猴原代肝細(xì)胞