母文庫實(shí)驗(yàn)由歐易生物完成。2021年3月16日，寧波大學(xué)陳劍平院士、孫宗濤研究員為共同通訊作者，在PNAS雜志（IF:9.412）在線發(fā)表了題為“AclassofindependentlyevolvedtranscriptionalrepressorsinplantRNAvirusesfacilitatesviralinfectionandvectorfeeding”的研究論文，深入報(bào)道了在不同植物RNA病毒中一種***存在的、通過劫持茉莉酸信號(hào)途徑以協(xié)同促進(jìn)病毒傳播和介體昆蟲攝食的新機(jī)制。植物病毒基因組通常*編碼少數(shù)幾個(gè)蛋白，它們必需依賴寄主植物才能完成自身的侵染和增殖。因此植物病毒往往通過其編碼的蛋白來劫持或者利用寄主因子來實(shí)現(xiàn)自身的復(fù)制，并在植物體內(nèi)傳播，產(chǎn)生系統(tǒng)性***。酵母膜系統(tǒng)文庫構(gòu)建與篩選技術(shù)。江蘇技術(shù)酵母文庫做什么
酵母雙雜交、GSTpull-down實(shí)驗(yàn)顯示，SWC6可以直接與HY5、HYH相互作用（圖A-C）。pull-down實(shí)驗(yàn)顯示ARP6同樣可以與HY5、HYH相互作用（圖D）。split-LUC、Co-IP實(shí)驗(yàn)證實(shí)HY5可以與SWC6、ARP6結(jié)合（圖E-J）。下胚軸表型分析顯示，藍(lán)光下arp6hy5hyh三突變體下胚軸長(zhǎng)度明顯大于arp6突變體、hy5hyh雙突變體，表明ARP6和HY5有可能通過不同途徑調(diào)控下胚軸的發(fā)育。Semi-in vivo pull-down、Co-IP 實(shí)驗(yàn)顯示，藍(lán)光下，在 CRY1 存在下，SWC6 與 ARP6 的結(jié)合***增強(qiáng)。表明藍(lán)光***的 CRY1 可能通過藍(lán)光依賴的 CRY1-SWC6/ARP6 相互作用增強(qiáng) SWC6 與 ARP6 的結(jié)合。安徽酵母文庫領(lǐng)域酵母文庫篩選研究多年建庫與篩選經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)證。
酵母文庫實(shí)驗(yàn):本研究報(bào)道了 OsNF-YB9 和 OsNF-YB7 在水稻中呈現(xiàn)亞功能化。OsNF-YB7 主要在胚中表達(dá)，而 OsNF-YB9 主要在發(fā)育中的胚乳中表達(dá)。在擬南芥 lec1-1 中異源表達(dá) OsNF-YB9 或 OsNF-YB7 可以彌補(bǔ) lec1-1 缺陷。OsNF-YB9 功能缺失導(dǎo)致種子發(fā)育異常，種子變長(zhǎng)、變窄、變薄，堊白率較高。此外，osnf-yb9 中淀粉合成相關(guān)基因的表達(dá)紊亂。OsNF-YB9 可以與主要在水稻胚乳中表達(dá)的蔗糖合酶蛋白激酶 SPK 相互作用。spk 敲除突變體種子與 osnf-yb9 突變體種子都表現(xiàn)出堊白增加的表型。OsNF-YB9 在水稻和擬南芥中的異位表達(dá)導(dǎo)致了種子變小。綜上表明，OsNF-YB9 在水稻種子發(fā)育中起到關(guān)鍵調(diào)控作用。
酵母單雜交篩選：（4）在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中，***GL1促進(jìn)HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細(xì)胞中***表達(dá)，并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子，即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用，本研究中顯示HEK293T細(xì)胞中，***GL1過表達(dá)后，與LTR連接的螢火素酶表達(dá)上升近2倍，說明***GL1是一個(gè)轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是，文章的背景介紹內(nèi)容中，對(duì)應(yīng)用其他技術(shù)（如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等）對(duì)HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析，發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復(fù)制和潛伏期提供了見解，但并沒有直接評(píng)估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對(duì)酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)（如Chip-seq、motif預(yù)測(cè)）進(jìn)行了比較分析，發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對(duì)已識(shí)別因子的驗(yàn)證率為30-60%，同等或優(yōu)于其他技術(shù)。文庫質(zhì)粒與酵母文庫載體重組。
酵母單雜交結(jié)果顯示，磷酸鹽饑餓響應(yīng)因子OsPHR1/2/3可以***51個(gè)目標(biāo)啟動(dòng)子中的25個(gè)，包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以調(diào)控許多菌根共生相關(guān)基因的表達(dá)（圖A）。對(duì)叢枝菌根共生響應(yīng)基因啟動(dòng)子序列預(yù)測(cè)分析顯示，有78個(gè)轉(zhuǎn)錄因子被富集，87%的菌根共生響應(yīng)基因受到OsPHR1/2/3的調(diào)控，其中42%受到OsPHR1/2/3的直接調(diào)控。因此推測(cè)OsPHR1/2/3可能是菌根共生調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控樞紐（圖A-B）。EMSA和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)，OsPHR12可以直接結(jié)合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3啟動(dòng)子序列（圖C-F），并且這種結(jié)合依賴于啟動(dòng)子中的P1BS元件（圖G）。歐易生物酵母文庫擁有GAL4系統(tǒng)、泛素系統(tǒng)，單雜、雙雜等多種酵母雜交篩選方法。江蘇技術(shù)酵母文庫做什么
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酵母文庫：近日，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物育種栽培研究所儲(chǔ)黃偉副研究員、曹黎明研究員為共同通訊作者，在Plant，Cell&Environment雜志（IF：7.228）在線發(fā)表了題為“Aconservedclathrin-coatedvesiclecomponent，OsSCYL2，regulatesplantinnateimmunityinrice”的研究論文，報(bào)道了水稻中一個(gè)被網(wǎng)格蛋白包被囊泡的一個(gè)重要組分OsSCYL2調(diào)控稻水先天免疫的分子機(jī)制。上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物所碩士研究生姚瑤和周繼華助理研究員為該論文的共同***作者。文章中酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)由歐易生物完成。江蘇技術(shù)酵母文庫做什么
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