細胞培養(yǎng)過程中的細胞計數(shù)
細胞培養(yǎng)是指從動物或植物中取出細胞,然后使其在合適的人工環(huán)境中生長。這些細胞可于培養(yǎng)前直接從組織中取出并采用酶或機械方法進行解離,或者也可來自已經(jīng)建立的細胞系或細胞株。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,細胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程,細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)??寺 ?
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染色法鑒定機理
染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法,根據(jù)染色機理的不同,染料或使死細胞著色,或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質(zhì)上的差異主要包括:
死活細胞細胞膜通透性的差異:
活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質(zhì)選擇性的通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。
臺盼藍,又稱錐藍,是一種陰離子型染料,不能透過完整的細胞膜。所以經(jīng)臺盼藍染色后只能使死細胞著色,而活細胞不被著色 四川自動細胞計數(shù)儀價目表細胞計數(shù)儀的使用難度。
原代培養(yǎng)及其操作步驟
從供體內(nèi)取出組織后,經(jīng)機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群,使之在體外模擬人體生理環(huán)境,在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下,生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞常有不同的細胞成分,生長緩慢,但是更能說明所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養(yǎng)做各種實驗,如藥物測試、細胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。
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培養(yǎng)的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好,所以要精細細胞計數(shù),在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力,用臺盼蘭染細胞,死細胞著色,活細胞不著色,從而可以區(qū)分死細胞與活細胞。所以在細胞生物學(xué)研究過程中,細胞計數(shù)和細胞活率測定是非常重要的工作,血球計數(shù)板消耗了研究者大量時間與體力,且結(jié)果也不能得到保證,重復(fù)性差。
而全自動細胞計數(shù)儀擺脫了手工計數(shù)細胞的苦差和煩惱,同時結(jié)果更加準(zhǔn)確客觀,操作快速簡便,重復(fù)性好,尤其為我們科研工作者節(jié)省了寶貴的時間,使研究者把更多的精力放在更重要的工作上。 全自動細胞計數(shù)儀怎么使用?
如何讓細胞計數(shù)更加準(zhǔn)確
減少細胞結(jié)團率
細胞計數(shù)需要對整個細胞懸液中的少量樣本進行分析,因此必須注意確保樣品能夠原始整個單細胞懸液。TANK-CA0008以及及原始的血球計數(shù)板法等多種方法來對細胞活性進行監(jiān)控和計算。包括TANK-CA0008有采用臺盼藍,所以像是TANK-CA0008這樣的細胞計數(shù)器應(yīng)用算法來識別活細胞或死細胞,但它們不能對不具代表性的樣本進行校正。當(dāng)手動計數(shù)時,與單個細胞相比,細胞成團率/結(jié)團率的評分更具主觀性,從而增加了可變性。細胞裂解后的細胞向外釋放的DNA(會造成粘稠結(jié)團))和細胞碎片是結(jié)團的常見原因。細胞裂解可能是由于過度生長、過度移液的機械剪切或冷凍/解凍循環(huán)等因素造成的,而胰蛋白酶消化不足或過度也可能導(dǎo)致樣品的異質(zhì)性。目前為了降低細胞結(jié)團率,我們可以通過溫和細胞裂解的方式來進行嘗試,以防止過為劇烈的酶解方式會導(dǎo)致細胞凋亡過快從而釋放更多的DNA。如胰酶等需要謹慎使用。另外對細胞碎片的樣本進行過濾,甚至是過濾膜等方式,均可以減少細結(jié)團率。 細胞計數(shù)儀的體積有多大?四川有什么細胞計數(shù)儀比較價格
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可否使用與原先不同的血清種類?
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
細胞為何生長不均勻?
細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻,或者放入時搖勻,但在細胞貼壁前,又移動了培養(yǎng)瓶,頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少,培養(yǎng)箱擱板表面不平整,這些因素會導(dǎo)致細胞生長不均勻。 四川有什么細胞計數(shù)儀比較價格
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