蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測(cè)方法:質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一,可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),如磷酸化、乙酰化、泛素化、SUMO化、糖基化等,大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性。檢測(cè)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,了解它們?nèi)绾喂ぷ鳌⒂绊懙鞍踪|(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對(duì)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個(gè)富集步驟,因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測(cè)方法都是結(jié)合富集策略開(kāi)發(fā)的,以比較好的識(shí)別、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能。在早期的研究中,乙酰化修飾一直被認(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾。江蘇氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過(guò)程的重要方式,幾乎在每個(gè)細(xì)胞過(guò)程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè)。因此,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,可以對(duì)翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。江蘇氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義?在哺乳動(dòng)物細(xì)胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過(guò)磷酸化修飾,在脊椎動(dòng)物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過(guò)程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過(guò)激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號(hào)通路進(jìn)而參與調(diào)控生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育、逆境應(yīng)激、疾病發(fā)生等多種生命過(guò)程,一直是生物學(xué)研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)(P04)轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過(guò)程。
蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù):泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。樣品要求:1、SDS-PAGE條帶:5個(gè)以上可見(jiàn)考染條帶。2、溶液(目標(biāo)蛋白質(zhì)):目標(biāo)蛋白總量>50μg,目標(biāo)蛋白濃度>80%。3、溶液(大規(guī)模混合蛋白質(zhì)):蛋白總量>1mg,蛋白濃度>1μg/μl。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。
蛋白磷酸化修飾過(guò)程:蛋白磷酸化修飾這一過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過(guò)程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測(cè)方法:Western Blot檢測(cè)方法:Western Blot是檢測(cè)蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過(guò)程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識(shí)別磷酸化蛋白的抗體來(lái)鑒定目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會(huì)在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一。廣東蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)分析價(jià)格
常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括乙?;=K氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)是一種基于肽段分析的技術(shù)。對(duì)于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點(diǎn)上,不同位點(diǎn)可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會(huì)出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號(hào)分散。此外,對(duì)低豐度蛋白質(zhì)的識(shí)別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對(duì)糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對(duì)質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點(diǎn)。江蘇氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
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