杭州GC-MS非靶向代謝組學分析方法

來源: 發(fā)布時間:2022-01-13

靶向代謝組學:靶向代謝組學(Targeted Metabolomics)是代謝組學研究的重要組成部分,也是全代謝組研究的延伸與拓展。相對于全代謝組分析而言,靶向代謝組分析具有特異性強,檢測靈敏度高和定量準確等幾個特點。通過對血液、尿液或其他體液以及組織中某一特定的代謝物的富集與準確定量定性分析,一方面可以結合其它實驗數(shù)據(jù)揭示相關的分子生物學作用機制,另一方面,也可以為后續(xù)代謝分子標志物的深入研究和開發(fā)利用提供有力支持。靶向代謝組學可以用于:驗證有非靶向代謝組學實驗提出的假說;進行基于假說的探索性實驗,針對特定代謝物,研究代謝模型。在食品安全領域,利用代謝組學工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動植物體內(nèi)的相關生物標志物也是一個熱點領域。杭州GC-MS非靶向代謝組學分析方法

靶向代謝組學分析成功的關鍵因素是準確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測 (SIM),或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應離子監(jiān)測 (MRM) 進行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度,在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強的原因是延長了所選擇離子的采集時間。因為監(jiān)測的是一個很小的質(zhì)量窗口,所以質(zhì)量色譜圖只表示對極為特定質(zhì)量的檢測。在大多數(shù)情況下,靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進行質(zhì)譜定量的選擇方法,與 SIM 相比更為靈敏、更加特異??梢援a(chǎn)生獨特的碎片離子,可對非常復雜基質(zhì)中的目標化合物進行監(jiān)測和定量。哈爾濱GC-MS非靶向代謝組學應用代謝組學的研究處于生物信息流的中游。

代謝組學:代謝組學 (metabolomics)的出現(xiàn)是生命科學研究的必然。是對某一生物或細胞中相對分子量小于1,000的小分子代謝產(chǎn)物進行定性和定量分析的一門新學科。代謝組作為系統(tǒng)生物學的重要組成部分,在臨床醫(yī)學領域具有普遍的應用前景。 代謝產(chǎn)物是基因表達的產(chǎn)物,在代謝酶的作用下生成。雖然與基因或蛋白質(zhì)相比,代謝產(chǎn)物較小,但是不能形成代謝產(chǎn)物的細胞是死細胞,因此不能小看代謝產(chǎn)物的重要性。 研究人員通過對機體代謝產(chǎn)物的深入研究,可以判斷機體是否處于正常狀態(tài),而對基因和蛋白質(zhì)的研究都無法得出這樣的結論。事實上,代謝組學研究已經(jīng)能診斷出一些代謝類疾病,如糖尿病、肥胖癥,代謝綜合癥。目前,已經(jīng)研究清楚的普通代謝途徑包括三羧酸循環(huán)(TCA),糖酵解,花生四烯酸 (AA)/炎癥途徑。

藥物代謝和代謝組學區(qū)別:代謝組學與藥物代謝不同是它關注的對象不是外源性的藥物而是生物體本身就有的內(nèi)源性代謝物。這些代謝物是糖,脂肪,蛋白質(zhì),核酸,膽汁酸等等代謝得到的。還有共生菌代謝的,是一個龐大的混合物。目的是通過樣本的對比,發(fā)現(xiàn)潛在標志物,指導疾病早期診斷甚至基因水平的研究。而藥物代謝的目標是只要只要追蹤到這種藥物分子在體內(nèi)變化就好,相當具有靶向性,因此使用的技術手段就是LC-MS。檢測藥物的中間體,和具體的藥效,藥代動的效應。代謝組學與臨床化學較為相似。

LC-MS非靶向代謝組學:LCMS非靶向是通過液質(zhì)聯(lián)用(LC–MS)方法檢測生物體受擾動或刺激前后大量代謝產(chǎn)物的動態(tài)變化,從中找出表達差異的代謝物,進而闡明生物體代謝相關過程的代謝組學技術。LCMS非靶向代謝組學適用于分析難揮發(fā)或熱穩(wěn)定性差的代謝產(chǎn)物,具有高通量、高分辨率、高靈敏度的特點。超高壓液相色譜或超高效液相色譜(UPLC)通過采用更小粒徑的色譜填料配合更高的壓力,實現(xiàn)了更好的分離,具體包括更高的分離能力、更快的分離速度以及更好的靈敏度;串聯(lián)質(zhì)譜儀在MS掃描模式下,可實現(xiàn)高低碰撞能量快速切換,同時采集代謝物的一二級質(zhì)譜信息,結合代謝組學數(shù)據(jù)處理軟件對質(zhì)譜信息的解析,在單次分析中可檢測和鑒定幾百至幾千種代謝物。代謝組學著重研究的是生物整體、組織代謝途徑及其所受內(nèi)在或者外在因素的影響及隨時間變化的規(guī)律。濟南LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學分析研究

相比于其他組學,代謝組學有哪些特殊的優(yōu)勢?杭州GC-MS非靶向代謝組學分析方法

代謝組學發(fā)展至今,代謝組學技術已經(jīng)遠遠超出了標準臨床化學技術的范圍,能夠精確分析數(shù)百至數(shù)千種代謝物。代謝組學提供了代謝表型的詳細表征,并可以在許多水平上進行精密醫(yī)學研究,包括表征疾病基礎的代謝紊亂,發(fā)現(xiàn)新的治靶標以及發(fā)現(xiàn)可用于診斷疾病或監(jiān)測藥物的活性。比較常見的代謝組學分析方法是質(zhì)譜(MS)核磁共振(NMR)光譜。質(zhì)譜技術又分為LC-MS和GC-MS。其基本原理是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離,生成不同荷質(zhì)比的帶電荷的離子,經(jīng)加速電場的作用,形成離子束,進入質(zhì)量分析器。杭州GC-MS非靶向代謝組學分析方法

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