南京蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)方法

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-12

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾反應(yīng)是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,通過基于其氨基酸殘基的化學(xué)反應(yīng)獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端。現(xiàn)有的官能團(tuán)或新官能團(tuán)的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴(kuò)展20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的化學(xué)組成。翻譯后修飾的位點(diǎn)通常帶有可以在化學(xué)反應(yīng)中充當(dāng)親核試劑的官能團(tuán),如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時(shí),在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點(diǎn)。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點(diǎn)的一些亞甲基上。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。南京蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)方法

蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)定量分析:1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記,組織/細(xì)胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙酰化修飾組學(xué)定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學(xué)定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對乙酰化修飾肽段進(jìn)行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進(jìn)行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町悾Ξa(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。廣州蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)主要方式蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性。

蛋白翻譯后修飾:蛋白質(zhì)氨基酸序列的特定位置可以與化學(xué)基團(tuán)或者小分子量的蛋白共價(jià)結(jié)合從而發(fā)生蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs)。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)生物合成的一個(gè)步驟,翻譯后多肽鏈在成為成熟的蛋白質(zhì)產(chǎn)品之前要經(jīng)過修飾,PTMs的類型包括磷酸化、乙?;⑻腔?、泛素化和二硫鍵等等,它導(dǎo)致蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的大幅增加。對于任何給定的蛋白質(zhì),各種各樣的PTMs提供了一種通過改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能來促進(jìn)細(xì)胞快速變化的方法。PTMs在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和周轉(zhuǎn)率、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)識別和相互作用以及空間定位中起著至關(guān)重要的作用。

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細(xì)胞不同生長時(shí)期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化,許多至關(guān)重要的生命進(jìn)程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制,更重要的是被時(shí)空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個(gè)重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時(shí)其分子質(zhì)量會(huì)發(fā)生響應(yīng)的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時(shí),發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動(dòng)態(tài)范圍廣,所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進(jìn)行富集。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。

乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析:乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析是指從蛋白質(zhì)組學(xué)的水平分析蛋白質(zhì)乙酰化修飾,包括乙酰化蛋白質(zhì)的鑒定和定量。提供基于質(zhì)譜的乙酰化蛋白組研究服務(wù)。蛋白質(zhì)乙?;ńM蛋白乙?;头墙M蛋白乙酰化。組蛋白乙酰化主要是賴氨酸乙?;言诨蜣D(zhuǎn)錄調(diào)控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙酰化構(gòu)成了哺乳動(dòng)物細(xì)胞中乙酰化蛋白的主要部分,參與了所有主要生物過程,包括蛋白質(zhì)的定位、轉(zhuǎn)移、功能和降解,遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制等。除了重要的生物學(xué)功能以外,乙?;鞍踪|(zhì)及其調(diào)控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠?jīng)變形紊亂、心血管疾病等)緊密相關(guān)。因此,對乙酰化修飾蛋白質(zhì)組進(jìn)行研究有助于進(jìn)一步探索細(xì)胞的生命活動(dòng)與了解相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題?杭州蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)費(fèi)用

乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型。南京蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)方法

質(zhì)譜分析乙酰化蛋白質(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對蛋白質(zhì)組中的乙?;鞍走M(jìn)行鑒定、乙?;稽c(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙酰化定量蛋白組研究中時(shí),因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,需要先對乙酰化肽段進(jìn)行富集,然后再對富集得到的乙?;亩螛悠愤M(jìn)行定量分析。質(zhì)譜定量乙酰化蛋白組采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩危瑥亩鴮?shí)現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩危诿盖羞^程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進(jìn)行酶切。南京蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)方法

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