江蘇宏轉錄學組技術分析

轉錄組分析是目前應用比較廣的高通量測序分析技術之一。常見設計是不同樣品之間比較，尋找差異基因、標志基因、協(xié)同變化基因、差異剪接和新轉錄本，并進行結果可視化、功能注釋和網(wǎng)絡分析等。轉錄組的測序分析也相對成熟，從RNA提取、構建文庫、上機測序再到結果解析既可以自己完成，又可以在專業(yè)公司進行。概括來看轉錄組的分析流程比較簡單，序列比對-轉錄本拼接(可選)-表達定量-差異基因-功能富集-定制分析。整個環(huán)節(jié)清晰流暢，可以作為剛開始接觸高通量測序學習比較合適的技術之一。轉錄組學可以在單核苷酸水平對任意物種的整體轉錄活動進行檢測。江蘇宏轉錄學組技術分析

轉錄組學為什么原核物種只能做有參轉錄組分析？由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區(qū)域、操縱子及多順反子，如果按照無參轉錄組分析策略進行組裝的話，難度較大，組裝結果存在較大風險。轉錄組學差異基因數(shù)目多少比較合理？不同的處理，不同的研究目標，差異基因的數(shù)目是不同的，從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數(shù)目是個位數(shù)或者上萬，那么就需要和分析人員溝通一下，查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多，注釋信息太雜亂，怎么挑選目標基因？對不同的差異組合進行維恩圖分析，挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象；根據(jù)前人的文獻報道，挑選相關差異基因，不要局限在自己研究的物種上。山東宏轉錄學組費用轉錄學組測序能夠提供更準確的數(shù)字化信號。

轉錄組學，基因組學，蛋白質組學的區(qū)別：蛋白組學針對的是全體蛋白，組要以2D-Gel和質譜為主，分為top-down和bottom-up分析方法。理念和基因組類似，將蛋白用特定的物料化學手段分解成小肽段，在通過質量反推蛋白序列，之后進行搜索，標識已知未知的蛋白序列。轉錄組學研究的是某個時間點的mRNA總和，可以用芯片，也可以用測序。芯片是用已知的基因探針，測序則有可能發(fā)現(xiàn)新的mRNA?；蚪M學研究的主要是基因組DNA，使用方法目前以二代測序為主，將基因組拆成小片段后再用生物信息學算法進行迭代組裝。當然這只是第1步，隨后還有繁瑣的基因注釋等數(shù)據(jù)分析工作。

轉錄組學技術：轉錄組學（transcriptomics），是一門在整體水平上研究細胞中基因轉錄的情況及轉錄調控規(guī)律的學科。簡而言之，轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。轉錄組即一個活細胞所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。優(yōu)勢：高通量、更精確的數(shù)字信號；在單核苷酸水平對任意物種的整體轉錄活動進行檢測；分析轉錄本的結構和表達水平的同時，還能發(fā)現(xiàn)未知轉錄本和稀有轉錄本；準確地識別可變剪切和融合基因。應用方向：植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預；炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預；表達差異的研究；基因點突變及多態(tài)性檢測。轉錄學組測序可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測。

轉錄組學技術路線及研究意義：轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺，轉錄組測序無需預先針對已知序列設計探針，即可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測，提供更準確的數(shù)字化信號，更高的檢測通量以及更普遍的檢測范圍，是目前深入研究轉錄組復雜性的強大工具。基于高通量測序平臺的轉錄組測序技術能夠全方面獲得物種特定組織的轉錄本信息，從而進行基因表達水平研究、新轉錄本發(fā)現(xiàn)研究、轉錄本結構變異研究等。轉錄組學測序必須做生物學重復么？山東IncRNA轉錄組學鑒定

轉錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么？江蘇宏轉錄學組技術分析

RNA-seq轉錄組學技術優(yōu)勢有：1、可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度;2、靈敏度高，可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本;3、可以對任意物種進行全基因組分析，能夠檢測未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉錄本，并準確地識別可變剪切位點及cSNP，UTR區(qū)域;4、檢測范圍廣，能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。RNA-seq轉錄組學是需要生物學重復的，至少需要兩次生物學重復，3次以上的生物學重復更好。以3個重復為例，加上對照的三個生物學重復，一次RNA-seq需要6個樣本。江蘇宏轉錄學組技術分析

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