四川氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-08

蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過(guò)程不只受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制,還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見(jiàn)的修飾類(lèi)型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)。基于翻譯后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類(lèi)似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有有效性。四川氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾?作用機(jī)制和生物學(xué)功能是什么?前體蛋白是沒(méi)有活性的,常常要進(jìn)行一個(gè)系列的翻譯后加工,才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類(lèi)型是多種多樣的,一般分為以下幾種:N-端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和剪切。當(dāng)合成蛋白質(zhì)時(shí),20種不同的氨基酸會(huì)組合成為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的翻譯后蛋白質(zhì)其他的生物化學(xué)官能團(tuán)(如醋酸鹽、磷酸鹽、不同的脂類(lèi)及碳水化合物)會(huì)附在蛋白質(zhì)上從而改變蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì),或是造成結(jié)構(gòu)的改變(如建立雙硫鍵),來(lái)擴(kuò)闊蛋白質(zhì)的功能。再者,酶可以從蛋白質(zhì)的N末端移除氨基酸,或從中間將肽鏈剪開(kāi)。舉例來(lái)說(shuō),胰島素它會(huì)在建立雙硫鍵后被剪開(kāi)兩次,并在鏈的中間移走多肽前體,而形成的蛋白質(zhì)包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。四川蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)乙酰化修飾是體內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾類(lèi)型:根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類(lèi),即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì)、?;姿猁}蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)精氨酸、賴(lài)氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法。

蛋白翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)在準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用:盡管目前大數(shù)據(jù)的獲得會(huì)采用基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué),但是關(guān)鍵的發(fā)現(xiàn)還是依賴(lài)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)而得到的。近來(lái)越來(lái)越多的研究表明蛋白組學(xué)驅(qū)動(dòng)的準(zhǔn)確的醫(yī)學(xué)具有極大的實(shí)用性和普適性,蛋白組學(xué)的研究更加速了臨床轉(zhuǎn)化的進(jìn)程。蛋白翻譯后修飾(post-ranslational modification, PTM)賦予了蛋白種類(lèi)的豐富性及蛋白功能的多樣化,研究蛋白翻譯后修飾不只可以確定蛋白修飾(磷酸化、泛素化、?;?、甲基化、SUMO化等)或蛋白酶裂解的新位點(diǎn),還可以發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記物及探索藥物/化學(xué)調(diào)節(jié)物的作用機(jī)制。蛋白磷酸化修飾過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾原理:相較于沒(méi)有發(fā)生翻譯后修飾的蛋白,翻譯后修飾蛋白會(huì)在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的質(zhì)譜分析過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析;通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的相對(duì)分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定的肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下其序列信息和分子量是確定的,當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,因?yàn)榱姿岣姆肿恿恳彩谴_定的,所以在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中如果發(fā)現(xiàn)部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,則可以假設(shè)這個(gè)肽段發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)或多級(jí)質(zhì)譜的譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)即可實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾類(lèi)型鑒定及修飾位點(diǎn)分析等。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)價(jià)錢(qián)

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性。四川氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。四川氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

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