湖北外泌體蛋白質(zhì)組學研究

來源: 發(fā)布時間:2022-01-05

蛋白組學研究怎么做?PRM:平行反應(yīng)監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì)、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白質(zhì)/肽段進行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術(shù)基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣即可對復(fù)雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準確地特異性分析。蛋白質(zhì)組學技術(shù)有電噴霧質(zhì)譜。湖北外泌體蛋白質(zhì)組學研究

定量蛋白質(zhì)組學方法學介紹:Label-free:Label-free定量,即非標記的定量蛋白質(zhì)組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。Label-free定量不需要標記處理,操作簡單,可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,但對實驗操作的穩(wěn)定性、重復(fù)性要求較高,準確性也較標記定量差。因此,Label-free技術(shù)適合于大樣本量的定量比較,以及對無法用標記定量實現(xiàn)的實驗設(shè)計。武漢定量蛋白組學分析研究蛋白質(zhì)組的概念指由一個基因組,或一個細胞、組織表達的所有蛋白質(zhì)。

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學呢?目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進入質(zhì)譜,對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報告離子強度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學研究怎么做?當下蛋白組學研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強的Top20的多肽進行二級打碎,然后進入二級質(zhì)譜進行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。

蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學,包括對蛋白質(zhì)表達模式和蛋白質(zhì)組功能模式的研究。蛋白質(zhì)組學的發(fā)展對尋找疾病的診斷標志、篩選藥物靶點、毒理學研究等有重要意義,也因此被普遍應(yīng)用于醫(yī)學研究。蛋白質(zhì)組學研究,總體可分為一下幾個步驟:(1)差異篩選(Discovery)(2)初步驗證(Verification)(3)然后確診(Validation)。基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段,當前在醫(yī)療健康方面的應(yīng)用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學。近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學領(lǐng)域,如細胞生物學、神經(jīng)生物學等。

蛋白質(zhì)組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預(yù)測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學:蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。蛋白質(zhì)組學技術(shù)有飛行時間質(zhì)譜。浙江PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學

蛋白質(zhì)組學的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存。湖北外泌體蛋白質(zhì)組學研究

蛋白質(zhì)組學是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益,是生命科學進入后基因時代的特征。蛋白質(zhì)是生命存在和運動的物質(zhì)基礎(chǔ),是細胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活動的執(zhí)行者,亦是基因功能活動的執(zhí)行者,是生命現(xiàn)象復(fù)雜性和多變性的直接體現(xiàn)者。蛋白質(zhì)組研究是為了識別及鑒定一個細胞或組織所表達的全部蛋白質(zhì)以及它們的表達模式,是對基因組研究的重要補充,是對生物體在蛋白質(zhì)水平上定量、動態(tài)、整體性的研究。這類研究有助于了解蛋白的結(jié)構(gòu)、細胞的功能、生命的本質(zhì)及活動規(guī)律,為疾病的診斷、診療、疫苗及新藥開發(fā)提供科學依據(jù)。湖北外泌體蛋白質(zhì)組學研究

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