貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學：蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團，可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)，進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義，異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化，因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有可靠性。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

蛋白磷酸化檢測方法：一、Western Blot檢測方法優(yōu)勢：1. WB方法簡便，多數(shù)實驗室具備Western Blot設備條件。2. 許多磷酸化抗體十分靈敏，能夠檢測低至10ug的蛋白樣品。3. 對于豐度低的蛋白，可以先通過IP使用目標蛋白的抗體對目標蛋白進行富集，再進行WB檢測被磷酸化的蛋白，檢測效率可以提高幾倍甚至幾十倍。二、質(zhì)譜檢測方法：Western Blot的方法雖然簡便，但是對于大規(guī)模分析復雜的生物樣品的磷酸化水平就不再適用了。而質(zhì)譜卻能很好的解決這一問題。依靠高準確度質(zhì)譜儀，如今快速準確分析細胞中高豐度蛋白的磷酸化修飾已是非常簡單的事。具體的檢測方法為先通過SDS-PAGE膠，或者2D-PAGE膠等分離目標蛋白，將含有目標蛋白的條帶切下，胰酶消化，LC-MS/MS檢測分析蛋白序列和相應位點的磷酸化修飾。這個方法適用于同時檢測多個目標蛋白的磷酸化水平。哈爾濱糖基化修飾蛋白質(zhì)組學價錢質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。

蛋白質(zhì)修飾位點分析：基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性，從而檢測蛋白質(zhì)或者多肽上位點發(fā)生何種修飾?？蓹z測修飾類型如下： 磷酸化、糖基化、乙?；?、泛素化、丙?；?、丁酰化、丙二?；?、戊二?；?、琥珀酰化、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化：信號轉(zhuǎn)導、細胞周期、生長發(fā)育機理等；2、糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應答等；3、乙?；夯虮磉_調(diào)控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等；4、泛素化：細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復以及信號轉(zhuǎn)導等；5、甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等；6、丙?；?/ 丙二酰化 / 戊二?；?/ 琥珀?；褐饕嬖谟诰€粒體和細菌中，與代謝過程密切相關。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題？覆蓋率：覆蓋率越高，檢測和鑒定含有修飾基團的肽幾率就越大。修飾位點的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低，則檢測到修飾肽的機會會隨之減少。如果百分比較高（> 30％），則有助于識別修飾位點。棕櫚?；鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚酰化的主要功能是促進蛋白質(zhì)與細胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個棕櫚?；M成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì)，如豆蔻酰基。由于對S-棕櫚?；鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性，由于S-棕櫚?；揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?；摹，F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂酰化蛋白以及對目標修飾蛋白進行捕獲。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點：檢測特異性高。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法： Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬（如Mn2+）配合物對磷酸基團的親和，造成磷酸化蛋白遷移的滯留，再將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用相應蛋白的抗體識別，根據(jù)遷移滯留檢測蛋白磷酸化。技術優(yōu)勢特點：1、無放射危害。2、鑒定不受限于特異性識別蛋白質(zhì)磷酸化的抗體。3、適用于大規(guī)模磷酸化蛋白分析。4、與質(zhì)譜鑒定兼容，進行更為精細的分析鑒定。蛋白質(zhì)乙?；揎?，顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎上面嫁接上乙?；鶊F。四川琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學技術服務

乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測方法：質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術之一，可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications，PTMs），如磷酸化、乙酰化、泛素化、SUMO化、糖基化等，大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復雜性。檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾，了解它們?nèi)绾喂ぷ鳌⒂绊懙鞍踪|(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對遺傳學和表觀遺傳學的理解。目標蛋白的PTMs研究通常需要一個富集步驟，因為修飾蛋白的豐度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測方法都是結(jié)合富集策略開發(fā)的，以比較好的識別、驗證和研究目標蛋白中PTMs的功能。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

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