轉錄組分析是目前應用比較廣的高通量測序分析技術之一。常見設計是不同樣品之間比較,尋找差異基因、標志基因、協(xié)同變化基因、差異剪接和新轉錄本,并進行結果可視化、功能注釋和網絡分析等。轉錄組的測序分析也相對成熟,從RNA提取、構建文庫、上機測序再到結果解析既可以自己完成,又可以在專業(yè)公司進行。概括來看轉錄組的分析流程比較簡單,序列比對-轉錄本拼接(可選)-表達定量-差異基因-功能富集-定制分析。整個環(huán)節(jié)清晰流暢,可以作為剛開始接觸高通量測序學習比較合適的技術之一。轉錄組學有高通量、更精確的數字信號。河南IncRNA轉錄組學技術服務
轉錄組學為什么原核物種只能做有參轉錄組分析?由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區(qū)域、操縱子及多順反子,如果按照無參轉錄組分析策略進行組裝的話,難度較大,組裝結果存在較大風險。轉錄組學差異基因數目多少比較合理?不同的處理,不同的研究目標,差異基因的數目是不同的,從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數目是個位數或者上萬,那么就需要和分析人員溝通一下,查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標基因?對不同的差異組合進行維恩圖分析,挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象;根據前人的文獻報道,挑選相關差異基因,不要局限在自己研究的物種上。廣州mRNA-seq轉錄組學分析方法轉錄學組測序能夠提供更普遍的檢測范圍。
全轉錄組學測序技術優(yōu)勢:文庫優(yōu)化:針對不同長度的序列采用兩種文庫構建方法,采用去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。數據全:全轉錄組測序完成后可獲取4類主要RNA(miRNA,mRNA,lncRNA,circRNA)數據,可對這些數據進行標準分析及整合分析。關聯(lián)全:通過對mRNA/miRNA/lncRNA/circRN序列測定及后續(xù)分析,深入開展全轉錄組調控網絡(ceRNA網絡)分析。樣本類型:細胞,組織,體液、血清、血漿、全血,總RNA等。建議總RNA起始量:>15μg,濃度≥200ng/μL)。
轉錄組學(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內所有轉錄產物的匯合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合。轉錄組具有很強的時間和空間特性,是基因功能及結構研究的基礎和出發(fā)點,掌握了生物個體基因轉錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調控機制。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉錄本的基因序列信息。轉錄組學測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA的總和。
全轉錄組測序:狹義的轉錄組默認只包含mRNA,但是廣義的轉錄組指的是細胞或組織中所有轉錄產物的匯合,其中包含mRNA和非編碼RNA(non-codingRNA,ncRNA)。非編碼RNA目前的研究多集中在具有調控功能的smallRNA(以miRNA為表示),長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)和環(huán)狀RNA(circularRNA,circRNA)上,而這幾類ncRNA的調控對象都和mRNA有關。因此,全轉錄組即包含了ncRNAs和mRNA。全轉錄組測序即對以上四種ncRNA進行測序,并分析這四者之間復雜的相互作用關系。普通轉錄組測序主要適用于不同的生長階段或者發(fā)育過程。浙江單細胞轉錄組學定性分析
轉錄組學是研究細胞表型和功能的一個重要手段。河南IncRNA轉錄組學技術服務
circRNA轉錄組學:是一類具有閉合環(huán)狀結構的非編碼RNA分子,沒有5′帽子結構和3′poly(A)結構,主要位于細胞質或儲存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內[1]。大多數circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內含子環(huán)化而成的套索結構。同時由于circRNA含有大量的miRNA應答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導沉默復合體(RISC)的催化關鍵,然后導致circRNA降解。根據來源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內含子和外顯子組合的EIcircRNA,內含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產生的circRNA。河南IncRNA轉錄組學技術服務
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