泛素化修飾蛋白組學研究分析樣品要求:1. 如果您提供的是組織樣品,請您干冰將組織樣品寄給我們;植物組織樣本大于400mg,血液樣品至少2ml(血漿注意用EDTA防凝),血清2ml,尿液10ml,動物組織樣品至少2g,細胞樣品為1X10^8個細胞,酵母、微生物等干重400mg。2. 如果您提供的是蛋白樣品,請您保證蛋白總量在2-5mg;蛋白提取時使用普通的組織、細胞裂解液即可。3. 樣品運輸:請使用足量的干冰運輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。4. 在正式實驗之前,我們都會對您提供的樣品進行檢測,檢測合格后開始正式試驗。翻譯后修飾是指對翻譯后的蛋白質進行共價加工的過程。北京丙二?;揎椀鞍踪|組學主要技術
根據不同的作用位點,蛋白質乙?;揎椃譃椋喊l(fā)生在蛋白N端的乙?;揎?、發(fā)生在蛋白賴氨酸上的乙?;揎棥G罢甙l(fā)生在90%以上的真核生物新生蛋白上,對于新生蛋白的成熟和細胞定位非常重要,由N乙酰轉移酶(NATs)負責;而后者是一個可逆的過程,主要由賴氨酸乙酰化酶(KATs)和賴氨酸去乙?;福↘DACs),賴氨酸的乙?;揎検俏覀兡壳把芯康闹攸c。蛋白質磷酸化修飾應用領域:應用在食品工業(yè)方面,通過人工翻譯磷酸化修飾的蛋白可以普遍用于各種食用蛋白質的改性,以改善蛋白質品質。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麥面筋蛋白等。在人工磷酸化修飾的方法下,也可以研究各種蛋白質的功能和相關代謝途徑的調控。在醫(yī)學領域,蛋白質的磷酸化紊亂,會導致細胞周期調控異常,因此,病理的形成與蛋白質的磷酸化異常也有很大相關性。其分子機制問題對于病癥等重大疾病的研究具有相當的指導意義,這也是指當之無愧地成為生物學研究領域中的熱點。哈爾濱蛋白質甲基化修飾組學價錢乙?;揎椊M學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響。
磷酸化修飾蛋白質組學:在有機體內,磷酸化是蛋白翻譯后修飾中比較普遍的共價修飾形式,同時也是原核生物和真核生物中比較重要的調控修飾形式。磷酸化對蛋白質功能的正常發(fā)揮起著重要的調節(jié)作用,該過程是由蛋白質激酶(Kinase)催化的把ATP或GTP的γ位磷酸基轉移到底物蛋白質的氨基酸殘基,如絲氨酸(Serine,Ser,S)、蘇氨酸(Threonine,Thr,T)和酪氨酸(Tyrosine,Tyr,Y)等上的過程,而其逆向過程則是由蛋白質磷酸酶去除相應的磷酸基團。正是這兩種酶的相反作用及其中所涉及到的能量消耗與生成使磷酸化成為體內很多生理活動調控的首先選擇方式。
蛋白質翻譯后修飾:蛋白質翻譯后修飾 (Protein translational modifications,PTMs) 通過功能基團或蛋白質的共價添加、調節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質的降解來增加蛋白質組的功能多樣性。這些修飾包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;⒅|化和蛋白水解,幾乎影響正常細胞生物學和發(fā)病機制的所有方面。因此,識別和理解 PTM 在細胞生物學和疾病療理和預防的研究中至關重要。蛋白質翻譯后修飾 (PTMs) 進一步促進了從基因組水平到蛋白質組復雜性的增加。PTMs 是一種化學修飾,在功能蛋白質組中發(fā)揮關鍵作用,因為它們調節(jié)活性、定位以及與其他細胞分子(如蛋白質、核酸、脂質和輔助因子)的相互作用。翻譯后修飾可以發(fā)生在蛋白質生命周期的任何階段。
糖基化修飾蛋白質組學:蛋白質的糖基化具有異質性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質上的不同糖鏈上。糖基化的異質性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質,在電泳上會出現分散的條帶,導致信號分散。此外,對低豐度蛋白質的識別性差導致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現有的技術體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質性及其對質譜的影響,標記糖基化位點。從而實現高通量糖蛋白和糖基化位點的識別。常用的糖蛋白分離和富集技術有:a. 凝集素親和技術;b. 肼化學富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應?;谫|譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。已知的蛋白質翻譯后修飾種類有20多種。河南蛋白質甲基化修飾組學方法
目前,發(fā)現的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。北京丙二?;揎椀鞍踪|組學主要技術
蛋白質乙?;揎椊M學技術服務:乙?;揎検求w內高度保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調節(jié)。乙酰化修飾組學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,再結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實現大規(guī)模乙酰化的鑒定及定量。蛋白質泛素化修飾組學技術服務:泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細胞活動。北京丙二?;揎椀鞍踪|組學主要技術