四川常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程

來源: 發(fā)布時間:2022-05-27

蛋白組學(xué)常見研究模式主要有兩種:1.通過蛋白質(zhì)組學(xué)尋找疾病發(fā)生的發(fā)展的新型標(biāo)志物;2.結(jié)合其它組學(xué)建立疾病或者研究主題的表達(dá)譜和分子機(jī)制。蛋白質(zhì)組學(xué)( proteomics) 是指系統(tǒng)研究某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì),包括組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的氨基酸序列,蛋白質(zhì)的豐度,蛋白質(zhì)的修飾以及蛋白質(zhì)之間的相互作用。蛋白質(zhì)組和基因組( genome)在概念上有相關(guān)性,表示某一個蛋白質(zhì)組的蛋白質(zhì)是由基因組所編碼的,然而蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)在研究對象和研究方法上有很大的區(qū)別。在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。四川常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)組學(xué)研究:蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要分為自底向上(Bottom-Up)和自頂向下(Top-Down)兩種策略?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來鑒定蛋白質(zhì)。當(dāng)應(yīng)用該策略來分析蛋白質(zhì)組混合物時,因其類似于基因組測序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)(ShotgunProteomics)。“自頂向下”策略直接鑒定完整蛋白質(zhì),在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構(gòu)體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢??墒窃摬呗缘娜毕菔堑鞍踪|(zhì)在氣相中分離、電離及碎裂都十分困難。而鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段,使其在氣相中更容易被分離、電離和碎裂。所以鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中得到了比較普遍的應(yīng)用。山東PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測價格定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段。

蛋白質(zhì)組學(xué)常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學(xué)。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。蛋白質(zhì)組的概念指由一個基因組,或一個細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)組學(xué)在農(nóng)業(yè)生物科研領(lǐng)域的應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在農(nóng)業(yè)生物科研領(lǐng)域的應(yīng)用為作物生長發(fā)育、病蟲害防治、遺傳育種、畜牧獸醫(yī)學(xué)疾病診斷等方面發(fā)揮重要的作用,為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展開辟新途徑。蛋白質(zhì)組學(xué)在農(nóng)作物研究中的應(yīng)用:農(nóng)業(yè)是我國人口賴以生存的基礎(chǔ),而提高糧食產(chǎn)量和品質(zhì)則是農(nóng)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵。蛋白質(zhì)組學(xué)關(guān)鍵技術(shù)在作物遺傳育種、品系鑒定、品質(zhì)改良、逆境脅迫應(yīng)答等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的應(yīng)用,為農(nóng)業(yè)作物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供巨大的參考價值。蛋白質(zhì)組學(xué)可系統(tǒng)研究農(nóng)作物在特定環(huán)境或某個發(fā)育階段的組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,有助于作物發(fā)育過程機(jī)制的理解。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。貴陽定量乙?;鞍踪|(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)組研究是為了識別及鑒定一個細(xì)胞或組織所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)以及它們的表達(dá)模式。四川常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)方法:等電聚焦:等電聚焦(isoelectric focusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點進(jìn)行分離,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點位置時,其靜電荷數(shù)為零,在電場中不再移動,據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。四川常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程