泛素化修飾PRM定量驗(yàn)證：原理： 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。首先對(duì)泛素化的蛋白進(jìn)行胰酶消化，在賴氨酸的修飾位點(diǎn)上會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)甘氨酸的殘基(K-GG)，利用對(duì)泛素化賴氨酸（K-GG）具有高親和力的基序抗體，特異性富集復(fù)雜樣本中的泛素化肽段，結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是什么？哈爾濱蛋白質(zhì)丙二酰化修飾組學(xué)
蛋白翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定：蛋白質(zhì)翻譯后修飾（Post-Translational Modifications, PTMs）幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過(guò)程，并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性，包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能，對(duì)于蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。技術(shù)特點(diǎn)：時(shí)間快，周期短；識(shí)別位點(diǎn)準(zhǔn)確，采用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以準(zhǔn)確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點(diǎn)。適用范圍：已知蛋白序列；明確翻譯后修飾的類型。湖北蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)研究磷酸化修飾蛋白質(zhì)組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。
定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué)：蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾，它與信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等諸多生物學(xué)問(wèn)題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究。技術(shù)原理：在磷酸化肽段富集前先進(jìn)行 iTRAQ/TMT 標(biāo)記，然后通過(guò) TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段，之后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對(duì)樣品的定量分析。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有些什么？泛素化可以生產(chǎn)出單泛素化或多泛素化蛋白質(zhì)。后者在當(dāng)7個(gè)賴氨酸殘基的泛素與另一個(gè)泛素的甘氨酸C端連接形成。這種泛素分子鏈接在生物過(guò)程中起到重要的作用。共價(jià)結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶識(shí)別并降解，這是細(xì)胞內(nèi)短壽命蛋白質(zhì)和一些異常蛋白降解的普遍途徑。泛素化及類泛素化蛋白在細(xì)胞分裂，自噬，DNA修復(fù)，免疫應(yīng)答，細(xì)胞消亡等方面同樣起到關(guān)鍵作用。與消化道內(nèi)進(jìn)行的蛋白質(zhì)水解不同，從泛素與蛋白的結(jié)合到將蛋白水解成小的肽段，整個(gè)水解過(guò)程需要能量參與。人們開(kāi)始意識(shí)到泛素-蛋白酶系統(tǒng)是一個(gè)對(duì)于真核細(xì)胞非常重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)。磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)是原核生物和真核生物中比較重要的調(diào)控修飾形式。
定量N-糖基化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué)：蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX（S/T）（其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸）凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素（lectin）是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì)，能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合，它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后，通常用特定的單糖通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來(lái)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化，糖基化，泛素化，亞硝基化，甲基化，乙?；?，脂質(zhì)化和蛋白水解。蛋白質(zhì)琥珀?；揎椊M學(xué)主要方式
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)的特征，雖然具有挑戰(zhàn)性，但提供了對(duì)病因?qū)W過(guò)程下的細(xì)胞功能的無(wú)價(jià)的洞察。哈爾濱蛋白質(zhì)丙二?；揎椊M學(xué)
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的介紹：泛素由76個(gè)氨基酸組成，高度保守，普遍存在于真核細(xì)胞內(nèi)，故名泛素。泛素化是可逆的，依賴ATP并且通過(guò)泛素刺激酶E1，泛素結(jié)合酶E2，泛素連接酶E3一系列催化反應(yīng)所致。這些特殊的酶包括泛素酶，結(jié)合酶、連結(jié)酶和降解酶等。泛素化在蛋白質(zhì)的定位、代謝、功能、調(diào)節(jié)和降解中都起著十分重要的作用。同時(shí)，它也參與了細(xì)胞周期、增殖、凋亡、分化、轉(zhuǎn)移、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號(hào)傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控。泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此，作為近年來(lái)生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果，它已然成為研究、開(kāi)發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。哈爾濱蛋白質(zhì)丙二?；揎椊M學(xué)