泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有些什么?泛素化可以生產(chǎn)出單泛素化或多泛素化蛋白質(zhì)。后者在當(dāng)7個賴氨酸殘基的泛素與另一個泛素的甘氨酸C端連接形成。這種泛素分子鏈接在生物過程中起到重要的作用。共價結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶識別并降解,這是細(xì)胞內(nèi)短壽命蛋白質(zhì)和一些異常蛋白降解的普遍途徑。泛素化及類泛素化蛋白在細(xì)胞分裂,自噬,DNA修復(fù),免疫應(yīng)答,細(xì)胞消亡等方面同樣起到關(guān)鍵作用。與消化道內(nèi)進(jìn)行的蛋白質(zhì)水解不同,從泛素與蛋白的結(jié)合到將蛋白水解成小的肽段,整個水解過程需要能量參與。人們開始意識到泛素-蛋白酶系統(tǒng)是一個對于真核細(xì)胞非常重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。武漢蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。杭州糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)是植物體內(nèi)比較常見的PTM修飾手段。
磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué):磷酸化修飾蛋白質(zhì)組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。由于體內(nèi)磷酸化蛋白的含量很低,因此在分析前必須對其進(jìn)行分離和富集。目前,常用的磷酸化蛋白質(zhì)的分離和富集技術(shù)包括固定化金屬親和色譜、免疫沉淀、強陽離子交換色譜、強陰離子交換色譜、反相色譜等。這些技術(shù)被整合和優(yōu)化用于不同生物樣品的磷酸化蛋白質(zhì)組分析。翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進(jìn)行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜與配備電子轉(zhuǎn)移解離(的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機聯(lián)用,對樣品進(jìn)行理想的分離。譜識別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行,但是由于估計適當(dāng)?shù)腻e誤發(fā)現(xiàn)率的問題,需要對結(jié)果進(jìn)行過濾。
蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù):乙酰化修飾是體內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,對細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,再結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙酰化的鑒定及定量。蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。
糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號分散。此外,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點。從而實現(xiàn)高通量糖蛋白和糖基化位點的識別。常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學(xué)富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。貴陽蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)方法
蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程。武漢蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)主要技術(shù)
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)介紹: 蛋白質(zhì)泛素化修飾(Ubiquitylation)是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是指一個或多個泛素分子(Ubiquitin,由76個氨基酸組成的多肽)在一系列特殊的酶作用下,將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類,從中選出靶蛋白分子,并對靶蛋白進(jìn)行特異性修飾的過程。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物80%~85%的蛋白質(zhì)降解。除參與蛋白質(zhì)降解之外,泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期、增殖、細(xì)胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控。武漢蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)主要技術(shù)