蛋白質(zhì)組學(xué)研究應(yīng)用:近年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞分化、蛋白質(zhì)折疊等。生物信息學(xué)的發(fā)展已給蛋白質(zhì)組研究提供了更方便、有效的計算機分析軟件,隨著基因組學(xué)的迅速推進,會給蛋白質(zhì)組研究提供更多更全的數(shù)據(jù)庫。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將推動新技術(shù)、新方法的發(fā)展。特別是蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)??茖W(xué)如基因組學(xué),生物信息學(xué)領(lǐng)域的交叉,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)研究模式,將成為未來的生命科學(xué)新前沿。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐。北京Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法
蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合相關(guān)技術(shù),利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。3.蛋白質(zhì)功能確定:如分析酶活性和確定酶底物,細胞因子的生物分析/配基-受體結(jié)合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達出來后在細胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。有的熒光蛋白表達系統(tǒng)就是研究蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)定位的一個很好的工具。山東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域近年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域。
蛋白質(zhì)組學(xué)的重要應(yīng)用領(lǐng)域有:在臨床疾病中的應(yīng)用、在微生物蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用、在植物研究中的應(yīng)用、在腎臟病學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。我們通過研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、預(yù)后評估信息;可以早期更為準確的診斷出胰腺?。灰部梢詾锳D的診斷、治理藥物的設(shè)計和篩選奠定基礎(chǔ)。這項研究技術(shù)其實離我們生活非常近,對我們生命而言尤為重要。近年來,高通量蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù),如雙向電泳、生物質(zhì)譜、蛋白質(zhì)芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學(xué)等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展。
蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略:蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要分為自底向上(Bottom-Up),自頂向下(Top-Down)和自中向下(Middle-Down)三種策略?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來鑒定蛋白質(zhì)。當(dāng)應(yīng)用該策略來分析蛋白質(zhì)組混合物時,因其類似于基因組測序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)(Shotgun Proteomics),該策略依賴于蛋白酶的酶切?!白灾邢蛳隆辈呗砸惨蕾囉诘鞍酌傅拿盖?,但是由于采用了另外的酶,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞分化、蛋白質(zhì)折疊等。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)實驗原理:PRM技術(shù)是一種根據(jù)已知實測信息或質(zhì)譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質(zhì)進行靶向定量的技術(shù)。該技術(shù)主要應(yīng)用儀器為Q Exactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過濾器,特異性地選擇與預(yù)先設(shè)定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質(zhì)譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術(shù)的結(jié)合使得PRM技術(shù)有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景。江蘇定量乙?;鞍踪|(zhì)組學(xué)報價
蛋白質(zhì)組研究為疾病的診斷、疫苗及新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。北京Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法
蛋白質(zhì)組學(xué)植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動物,蛋白占比不高,所以送樣在量上面的要求會多一些,推薦送500mg以上的量可以確保實驗?zāi)軌蛱崛〉匠渥愕牡鞍?。如果是種仁、豆類等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,不推薦用錫紙包裹,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時需要添加干冰。北京Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法