蛋白質(zhì)組學樣品寄樣要求:動物組織的樣本蛋白量相對較高,送樣量的要求也相對比較寬松,一般提供50~100mg的量即可。此外,組織上有血跡、脂肪、結締組織的還需要用PBS和組織剪將其清理干凈。送樣前將樣品用液氮速凍5min,放置在-80℃保存,送樣時需要置于干冰環(huán)境中運輸。動物的懸浮培養(yǎng)細胞也是比較熱門的蛋白組學研究對象,如果想做細胞的蛋白組學,起碼需要1×107個細胞,離心后收集,置于-80攝氏度環(huán)境中。蛋白質(zhì)組學,指對某一基因組所表達的所有蛋白質(zhì)及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網(wǎng)絡。質(zhì)譜技術相較于傳統(tǒng)蛋白質(zhì)鑒定技術而言,擁有靈敏、準確、高通量、自動化等特點。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜分析
蛋白質(zhì)組學研究策略有什么?“自頂向下”策略并不依賴于蛋白酶的酶切,而是直接鑒定完整蛋白質(zhì),在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢。可是該策略的缺陷是蛋白質(zhì)在氣相中分離、電離及碎裂都十分困難。而鳥管法蛋白質(zhì)組學由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段,使其在氣相中更容易被分離、電離和碎裂;所以鳥管法蛋白質(zhì)組學在蛋白質(zhì)組學研究中得到了比較普遍的應用?!白灾邢蛳隆辈呗砸惨蕾囉诘鞍酌傅拿盖?,但是由于采用了另外的酶,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。河南蛋白質(zhì)定量組學檢測價格蛋白質(zhì)組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。
常用的定量蛋白質(zhì)組學技術方法有以下幾類:非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術:Label free定量蛋白組學技術是通過液質(zhì)聯(lián)用技術對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內(nèi)部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質(zhì)進行相對定量。TMT定量蛋白組學技術:這種技術采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標簽,特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。
定量蛋白質(zhì)組學技術:定量蛋白質(zhì)組學是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容,通過對基因表達產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達情況。近年來,隨著非凝膠技術的發(fā)展,蛋白質(zhì)組學(“Shotgun”proteomics)技術,特別是多維蛋白質(zhì)鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達和定性和定量分析的強有力工具。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質(zhì)組學是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。
定量N-糖基化蛋白質(zhì)組學:蛋白質(zhì)的N-糖基化位點修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,主要在復雜的多細胞或組織形成過程中起關鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點具有保守的氨基酸序列NX(S/T)(其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸)凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學中應用普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結合蛋白質(zhì),能專一識別某一特殊結構的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結合,它們與糖鏈可逆非共價結合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用lectin 富集 N- 糖基化肽段,然后用 N- 糖酰胺酶(PNGase)在 H218O 中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。蛋白質(zhì)組研究技術涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導、細胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜分析
蛋白質(zhì)組學跟其它學科的交叉也將日益明顯和重要。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜分析
蛋白質(zhì)組學植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動物,蛋白占比不高,所以送樣在量上面的要求會多一些,推薦送500mg以上的量可以確保實驗能夠提取到充足的蛋白。如果是種仁、豆類等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,不推薦用錫紙包裹,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時需要添加干冰。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜分析