蛋白質(zhì)組學植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動物,蛋白占比不高,所以送樣在量上面的要求會多一些,推薦送500mg以上的量可以確保實驗?zāi)軌蛱崛〉匠渥愕牡鞍住H绻欠N仁、豆類等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,不推薦用錫紙包裹,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時需要添加干冰。蛋白質(zhì)組學包括蛋白與蛋白相互作用等。北京PRM定量蛋白質(zhì)組學服務(wù)
蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。labelfree-非標定量法分析技術(shù)方法:非標定量法[Labelfree]是近年來重要的質(zhì)譜定量方法,通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化。蛋白質(zhì)非標記定量技術(shù)(LabelFree)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內(nèi)部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。河南蛋白質(zhì)組學研究蛋白質(zhì)組學與其它學科的交叉也將推動新技術(shù)、新方法的發(fā)展。
Label Free 非標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)優(yōu)點:無需標記,比較大程度的保留樣本的真實性;可以區(qū)分“有”、“無”蛋白;不受標簽數(shù)量的限制,多個樣本可以同時進行蛋白定量分析;不同物種和不同的樣本類型可以同時開展蛋白定量分析;處理步驟簡單,成本低。 DIA 定量蛋白質(zhì)組學:數(shù)據(jù)非依賴性采集(DIA)是一種明顯提升蛋白質(zhì)組學研究通量和可重復(fù)性的技術(shù)。經(jīng)典的 DIA 流程通常依賴于 DDA 譜圖庫的構(gòu)建,需要消耗大量的樣品,且周期長,成本高。越來越多的不依賴于 DDA 建庫的分析方法相繼誕生。
蛋白質(zhì)組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預(yù)測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學:蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性也遠遠高于基因組,這是因為一個基因≠一個轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物≠一個蛋白質(zhì)。
定量蛋白質(zhì)組學技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容,通過對基因表達產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達情況。近年來,隨著非凝膠技術(shù)的發(fā)展,蛋白質(zhì)組學(“Shotgun”proteomics)技術(shù),特別是多維蛋白質(zhì)鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復(fù)雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達和定性和定量分析的強有力工具。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組學可以通過系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達和翻譯后修飾變化對疾病的影響。北京PRM定量蛋白質(zhì)組學服務(wù)
蛋白質(zhì)組研究不只可以實現(xiàn)與基因組的關(guān)聯(lián),揭示生命活動的發(fā)生規(guī)律。北京PRM定量蛋白質(zhì)組學服務(wù)
iTRAQ/TMT標記定量蛋白質(zhì)組介紹:iTRAQ/TMT標記定量蛋白質(zhì)組研究是對一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復(fù)雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進行標記,利用標記試劑中的二級報告離子來對蛋白進行精確鑒定和定量。技術(shù)優(yōu)勢:1、適用范圍廣:可檢測到的蛋白除了胞漿蛋白外,還有線粒體蛋白、膜蛋白。也能對任何類型的蛋白質(zhì)進行鑒定,包括高分子量,酸性,堿性蛋白質(zhì);2、高通量:一次可以實現(xiàn)多個樣品的定性定量分析,特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。北京PRM定量蛋白質(zhì)組學服務(wù)