定量蛋白質(zhì)組學技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)主要分為標記(label)和非標記(labelfree)定量策略,標記策略又分為體內(nèi)標記和體外標記兩種。細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常。定量蛋白質(zhì)組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進行精確的定量和鑒定。非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術(shù),Labelfree定量蛋白組學技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內(nèi)部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”。廣東蛋白質(zhì)組學分析價格
蛋白組學樣本要求:常規(guī)組織:(心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等)PBS洗滌去除殘留血液和污染物,剔除無關(guān)的干擾組織(血管、脂肪、結(jié)締組織等);沖洗干凈,用組織剪或手術(shù)刀將組織分離成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟骨組織:PBS洗滌去除殘留血液和污染物;用手術(shù)刀將軟骨切成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟體動物(吸蟲等)PBS洗滌去除來自宿主的污染;液氮速凍5min,保存于-80℃。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。湖北TMT/iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學研究方法蛋白質(zhì)組學技術(shù)有等電聚焦。
什么樣本能做蛋白組學檢測?大概可以測到多少的蛋白種類?原則上只要能提取到蛋白,就可以做蛋白組檢測。樣本測到的蛋白種類跟數(shù)據(jù)庫和樣本本身蛋白濃度有關(guān),一般數(shù)據(jù)庫越大,可以鑒定到的蛋白質(zhì)數(shù)量越多。也與樣本的類型有關(guān),通常,組織細胞相比于體液樣本,能夠鑒定到更多的蛋白。蛋白組學樣本寄送前是否需要精確計數(shù)或是稱量?不同樣本寄送會有不同的送樣要求,按照收集方法提供可以保證實驗用量充足。不需要精確計數(shù)或是稱量,項目開展前會進行蛋白濃度的測定,后續(xù)也是不同樣本等蛋白量處理、上機檢測,但是要保證每個樣本的寄樣量達到實驗要求。
我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學呢?目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進入質(zhì)譜,對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報告離子強度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學研究怎么做?當下蛋白組學研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強的Top20的多肽進行二級打碎,然后進入二級質(zhì)譜進行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。蛋白質(zhì)組學現(xiàn)已被普遍應(yīng)用于生命科學研究領(lǐng)域。
蛋白組究竟研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達量與實際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組學相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊龋舶▽@些翻譯后修飾的定量研究。近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學領(lǐng)域。武漢修飾蛋白組學檢測多少錢
有很多蛋白質(zhì)組學的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關(guān)研究和日常工作。廣東蛋白質(zhì)組學分析價格
蛋白質(zhì)組學研究應(yīng)用:近年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學領(lǐng)域,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞分化、蛋白質(zhì)折疊等。生物信息學的發(fā)展已給蛋白質(zhì)組研究提供了更方便、有效的計算機分析軟件,隨著基因組學的迅速推進,會給蛋白質(zhì)組研究提供更多更全的數(shù)據(jù)庫。另外,蛋白質(zhì)組學與其它學科的交叉也將推動新技術(shù)、新方法的發(fā)展。特別是蛋白質(zhì)組學與其它大規(guī)??茖W如基因組學,生物信息學領(lǐng)域的交叉,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學研究模式,將成為未來的生命科學新前沿。廣東蛋白質(zhì)組學分析價格