翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過程的重要方式,幾乎在每個(gè)細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測。蛋白質(zhì)是各種細(xì)胞功能比較重要的執(zhí)行者,其功能正常與否決定著生命活動(dòng)能否有序、高效的進(jìn)行,而其中翻譯后修飾起著至關(guān)重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質(zhì)中不同氨基酸殘基上的生物化學(xué)官能團(tuán),進(jìn)而改變其化學(xué)性質(zhì)或結(jié)構(gòu),使得蛋白質(zhì)具有更為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和更為完善的功能,實(shí)現(xiàn)更為精細(xì)的調(diào)節(jié)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過程極其復(fù)雜,已知的翻譯后修飾種類有20多種。但其中較為常見的主要是磷酸化、泛素化、SUMO化、酰(含乙酰)化、甲基化以及糖基化。已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾種類有20多種。深圳蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)分析研究
蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。濟(jì)南泛素化修飾PRM定量驗(yàn)證乙?;揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?,將乙酰CoA的乙?;鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上。
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位。在糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。蛋白質(zhì)經(jīng)過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對(duì)蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作用。凝素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用比較普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。
蛋白翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過程,并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能,對(duì)于蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。技術(shù)特點(diǎn):時(shí)間快,周期短;識(shí)別位點(diǎn)準(zhǔn)確,采用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以準(zhǔn)確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點(diǎn)。適用范圍:已知蛋白序列;明確翻譯后修飾的類型。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是通過在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)實(shí)驗(yàn)流程:1)組織/細(xì)胞破碎,提取蛋白質(zhì);2)蛋白酶解成多肽片段;3)對(duì)多肽片段進(jìn)行 iTRAQ 標(biāo)記;4)高效特異性乙酰化抗體富集乙?;揎楇亩危?)使用 LC-MS/MS 對(duì)富集的乙?;亩芜M(jìn)行序列分析;5)數(shù)據(jù)分析,比對(duì)不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對(duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。乙酰化是一個(gè)普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,不僅集中在對(duì)細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對(duì)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面,而且還影響參與細(xì)胞周期和新陳代謝、肌動(dòng)蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙?;粌H存在于真核細(xì)胞中,而且越來越多的證據(jù)也表明乙?;瑯佑绊懺S多原核細(xì)胞的生理生化過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。山東乙?;揎桺RM定量驗(yàn)證
蛋白質(zhì)磷酸化修飾怎么定義?深圳蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)分析研究
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)產(chǎn)品:常規(guī)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究往往只關(guān)注不同生理、病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,越來越多的研究發(fā)現(xiàn),許多重要的生命活動(dòng)、疾病發(fā)生不僅與蛋白質(zhì)的豐度相關(guān),更重要的是被各類蛋白質(zhì)翻譯后修飾所調(diào)控。因此深入研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾對(duì)揭示生命活動(dòng)的機(jī)理、篩選疾病的臨床標(biāo)志物、鑒定藥物靶點(diǎn)等方面都具有重要意義。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度。深圳蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)分析研究