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泛素化修飾PRM定量驗(yàn)證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。首先對(duì)泛素化的蛋白進(jìn)行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點(diǎn)上會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)甘氨酸的殘基(K-GG),利用對(duì)泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復(fù)雜樣本中的泛素化肽段,結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法,實(shí)現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。濟(jì)南亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)
乙酰化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用方向有什么?1、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷:生物標(biāo)志物,疾病機(jī)理機(jī)制,疾病分型,個(gè)性化治理等;2、生物醫(yī)藥:藥物作用機(jī)理,藥效評(píng)價(jià),藥物開發(fā)等;3、微生物領(lǐng)域:致病機(jī)理,耐藥機(jī)制,病原體-宿主相互作用研究等;4、海洋水產(chǎn):漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;5、生物能源、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域:發(fā)酵過程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),環(huán)境危定風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究等;6、食品營養(yǎng):食品儲(chǔ)藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測(cè)等。浙江泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個(gè)共價(jià)加工過程。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長的不同時(shí)期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過程不僅受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制,還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)?;诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?
蛋白質(zhì)翻譯后修飾自中而下分析策略:自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進(jìn)行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜(WCX-HILIC)與配備電子轉(zhuǎn)移解離(ETD)的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機(jī)聯(lián)用,對(duì)樣品進(jìn)行理想的分離。譜識(shí)別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行,但是由于估計(jì)適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率的問題,需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行過濾。自上而下分析策略:自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對(duì)其進(jìn)行片段化,不需要蛋白質(zhì)水解消化。目前,有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法:離線和在線。前者用四維分離法,后者用WCX-HILIC。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有簡單的特性。南京蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)領(lǐng)域
目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。濟(jì)南亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;|(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。濟(jì)南亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)