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蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,通過相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫檢索匹配,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,并通過軟件完成數(shù)據(jù)檢索。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。在眾多乙?;揎椀牡鞍踪|(zhì)中,研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。廣東糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些
琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組:蛋白質(zhì)琥珀?;╯uccinylation)修飾是指琥珀酰基團(tuán)供體(如琥珀酰輔酶A)通過酶學(xué)或者非酶學(xué)的方式將琥珀?;鶊F(tuán)共價(jià)結(jié)合到底物蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基的過程。琥珀?;揎椯x予賴氨酸基團(tuán)2個(gè)負(fù)電荷,能夠引發(fā)更多蛋白質(zhì)特性的改變,且琥珀酰基團(tuán)空間結(jié)構(gòu)較大,對于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響更為明顯。在真核和原核生物中,琥珀?;且环N保守的修飾類型。琥珀?;鸵阴;哂蟹浅?qiáng)的相關(guān)性,在已有的研究中,大量發(fā)生琥珀?;奈稽c(diǎn)同時(shí)也能檢測到乙酰化修飾。琥珀?;瘏⑴c了很多關(guān)鍵能量代謝途徑(包括三羧酸循環(huán)、糖代謝等),影響線粒體中的代謝過程,對線粒體失調(diào)相關(guān)的疾病的研究具有重要價(jià)值。哈爾濱泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是什么?
甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:目前用于甲基化蛋白質(zhì)組分析的甲基化肽段富集抗體分為精氨酸甲基化(Me-R)抗體和賴氨酸甲基化(Me-K)抗體兩大類。根據(jù)氨基酸殘基上所含甲基化修飾基團(tuán)數(shù)量的不同,精氨酸甲基化(Me-R)抗體又包括:單甲基化精氨酸(MMA)抗體、非對稱二甲基化精氨酸(ADMA)抗體和對稱二甲基化精氨酸(SDMA)抗體;賴氨酸甲基化(Me-K)抗體又包括:賴氨酸單甲基化(K-Me)抗體、賴氨酸二甲基化(K-2Me)抗體和賴氨酸三甲基化(K-3Me)抗體。其中,Me-R的各類抗體需要單獨(dú)使用,而Me-K抗體可以混合使用。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)樣品要求:1、動物組織的樣品量濕重不少于200mg。2、植物細(xì)菌、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g。3、富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于5g;如植物的根,木質(zhì)部、韌皮部組織等。4、體液類(唾液、羊水、腦脊液等)10mL以上,要保證不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白質(zhì)提取物,濃度不少于2 mg/mL,總量不少于1 mg。為保證實(shí)驗(yàn)效果,請盡量告知緩沖液成分,如是否有硫脲、SDS、強(qiáng)離子鹽等等。另樣品中應(yīng)不含核酸、脂類、多糖等影響分離效果的成分。6、在細(xì)胞器蛋白質(zhì)組學(xué)方面,提取細(xì)胞器或亞細(xì)胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙酰基轉(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向有什么?1、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷:生物標(biāo)志物,疾病機(jī)理機(jī)制,疾病分型,個(gè)性化治理等;2、生物醫(yī)藥:藥物作用機(jī)理,藥效評價(jià),藥物開發(fā)等;3、微生物領(lǐng)域:致病機(jī)理,耐藥機(jī)制,病原體-宿主相互作用研究等;4、海洋水產(chǎn):漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;5、生物能源、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域:發(fā)酵過程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),環(huán)境危定風(fēng)險(xiǎn)評估研究等;6、食品營養(yǎng):食品儲藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測等。已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾種類有20多種。山東蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)對于蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。廣東糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些
泛素化修飾蛋白組學(xué)研究:泛素化修飾蛋白組學(xué)是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,質(zhì)譜分析前需要對修飾進(jìn)行富集以提高其豐度,然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對富集得到的泛素化肽段樣品進(jìn)行定量分析。廣東糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些