定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,可研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。Label free定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析。蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)多少錢(qián)
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):產(chǎn)品分類(lèi):a.相對(duì)定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa)。技術(shù)優(yōu)勢(shì):(1)無(wú)需抗體,可直接對(duì)樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。(2)高特異性、準(zhǔn)確度和靈敏度,靶向檢測(cè)目標(biāo)蛋白對(duì)應(yīng)的多個(gè)unique肽段。(3)通量高,可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)幾十個(gè)蛋白的定量檢測(cè)。樣本要求:動(dòng)物及臨床組織標(biāo)本100mg/sample,血清、血漿200μL/sample,細(xì)胞、微生物1×107cells/sample。應(yīng)用方向:驗(yàn)證修飾和非修飾定量蛋白組學(xué)結(jié)果;目標(biāo)蛋白相對(duì)定量和一定定量分析。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時(shí)代的科學(xué)研究,針對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)與定量。四川新型修飾蛋白組學(xué)項(xiàng)目蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類(lèi)健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益。
蛋白質(zhì)組學(xué)研究這樣做:蛋白質(zhì)組與基因組相對(duì)應(yīng),也是一個(gè)整體的概念,隨著基因組學(xué)研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學(xué)已逐漸成為研究熱點(diǎn),對(duì)蛋白組學(xué)的研究可以使我們更容易接近生命的機(jī)理本質(zhì),但探究成千上萬(wàn)的蛋白質(zhì)特性也是一個(gè)重大的技術(shù)挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)組(Proteome)指的是某一時(shí)刻或某一狀態(tài)基因組表達(dá)的所有相應(yīng)的蛋白,即細(xì)胞、組織或機(jī)體全部蛋白質(zhì)的存在及活動(dòng)形式,其是一個(gè)動(dòng)態(tài)概念,它是在組織、細(xì)胞的整體蛋白質(zhì)水平上,探索蛋白質(zhì)作用模式、功能機(jī)理、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互關(guān)系、從而獲得生命活動(dòng)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的全方面而深入的認(rèn)識(shí),以揭示生命活動(dòng)的基本規(guī)律。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場(chǎng)使質(zhì)譜進(jìn)樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫(kù)侖力與液滴表面張力達(dá)到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過(guò)程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀,這時(shí)液滴表面的電場(chǎng)非常強(qiáng)大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進(jìn)入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說(shuō)來(lái),肽段的混合物經(jīng)過(guò)液相色譜分離后,經(jīng)過(guò)偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時(shí)間一般較長(zhǎng)。目前,許多實(shí)驗(yàn)室兩種質(zhì)譜方法連用,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計(jì)探針或引物來(lái)獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)與重新組合。蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)有效的方法之一。
蛋白質(zhì)組學(xué)的目標(biāo)是要回答關(guān)于蛋白質(zhì)的4個(gè)方面的問(wèn)題:①細(xì)胞中蛋白質(zhì)的含量。②定位。③活性。④修飾。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法主要有:①蛋白質(zhì)雙向電泳。②氨基酸序列測(cè)定(包括N端測(cè)序和C端測(cè)序)。③質(zhì)譜。④生物信息學(xué)。發(fā)育蛋白質(zhì)組學(xué)指在某一特定的生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期,在特定的生長(zhǎng)條件下,特定的細(xì)胞、組織中所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。發(fā)育蛋白質(zhì)組學(xué)揭示了在每個(gè)特定時(shí)期所表達(dá)的蛋白質(zhì)和這些不同的蛋白質(zhì)在特殊的生長(zhǎng)時(shí)期可能發(fā)揮的作用,是進(jìn)一步了解和深入研究蛋白質(zhì)功能的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略有什么?浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程
Label Free 非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)無(wú)需標(biāo)記,比較大程度的保留樣本的真實(shí)性。蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)多少錢(qián)
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點(diǎn)進(jìn)行分離,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,在電場(chǎng)中形成正極為酸性,負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點(diǎn)的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場(chǎng)中移動(dòng);當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點(diǎn)位置時(shí),其靜電荷數(shù)為零,在電場(chǎng)中不再移動(dòng),據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)多少錢(qián)