四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域

乙?；揎椀鞍捉M學(xué)實(shí)驗(yàn)流程：1）組織/細(xì)胞破碎，提取蛋白質(zhì)；2）蛋白酶解成多肽片段；3）對(duì)多肽片段進(jìn)行 iTRAQ 標(biāo)記；4）高效特異性乙?；贵w富集乙?；揎楇亩?；5）使用 LC-MS/MS 對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行序列分析；5）數(shù)據(jù)分析，比對(duì)不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町?，并對(duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。乙酰化是一個(gè)普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，不僅集中在對(duì)細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對(duì)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面，而且還影響參與細(xì)胞周期和新陳代謝、肌動(dòng)蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙?；粌H存在于真核細(xì)胞中，而且越來(lái)越多的證據(jù)也表明乙酰化同樣影響許多原核細(xì)胞的生理生化過(guò)程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加。四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究：泛素化修飾蛋白組學(xué)是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣，質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度，然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對(duì)富集得到的泛素化肽段樣品進(jìn)行定量分析。杭州乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)類型質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)樣品要求：1、動(dòng)物組織的樣品量濕重不少于200mg。2、植物細(xì)菌、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g。3、富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于5g；如植物的根，木質(zhì)部、韌皮部組織等。4、體液類（唾液、羊水、腦脊液等）10mL以上，要保證不能溶血；血清要求500μl以上；尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白質(zhì)提取物，濃度不少于2 mg/mL，總量不少于1 mg。為保證實(shí)驗(yàn)效果，請(qǐng)盡量告知緩沖液成分，如是否有硫脲、SDS、強(qiáng)離子鹽等等。另樣品中應(yīng)不含核酸、脂類、多糖等影響分離效果的成分。6、在細(xì)胞器蛋白質(zhì)組學(xué)方面，提取細(xì)胞器或亞細(xì)胞器后，蛋白沉淀量在1 mg以上。

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過(guò)程的重要方式，幾乎在每個(gè)細(xì)胞過(guò)程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè)。蛋白質(zhì)是各種細(xì)胞功能比較重要的執(zhí)行者，其功能正常與否決定著生命活動(dòng)能否有序、高效的進(jìn)行，而其中翻譯后修飾起著至關(guān)重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質(zhì)中不同氨基酸殘基上的生物化學(xué)官能團(tuán)，進(jìn)而改變其化學(xué)性質(zhì)或結(jié)構(gòu)，使得蛋白質(zhì)具有更為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和更為完善的功能，實(shí)現(xiàn)更為精細(xì)的調(diào)節(jié)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過(guò)程極其復(fù)雜，已知的翻譯后修飾種類有20多種。但其中較為常見(jiàn)的主要是磷酸化、泛素化、SUMO化、酰(含乙酰)化、甲基化以及糖基化。在有機(jī)體內(nèi)，磷酸化是蛋白翻譯后修飾中比較普遍的共價(jià)修飾形式。

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究分析樣品要求：1. 如果您提供的是組織樣品，請(qǐng)您干冰將組織樣品寄給我們；植物組織樣本大于400mg，血液樣品至少2ml(血漿注意用EDTA防凝)，血清2ml，尿液10ml，動(dòng)物組織樣品至少2g，細(xì)胞樣品為1X10^8個(gè)細(xì)胞，酵母、微生物等干重400mg。2. 如果您提供的是蛋白樣品，請(qǐng)您保證蛋白總量在2-5mg；蛋白提取時(shí)使用普通的組織、細(xì)胞裂解液即可。3. 樣品運(yùn)輸：請(qǐng)使用足量的干冰運(yùn)輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運(yùn)輸過(guò)程中樣品降解的可能性。4. 在正式實(shí)驗(yàn)之前，我們都會(huì)對(duì)您提供的樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)合格后開始正式試驗(yàn)。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。浙江蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)領(lǐng)域

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題？四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域

蛋白質(zhì)翻譯后修飾加入的官能團(tuán)反應(yīng)有：1、乙?；ǔＳ诘鞍踪|(zhì)的N末端加入乙酰。2、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3、甲基化——烷基化中常見(jiàn)的一種，在賴氨酸、精氨酸等的側(cè)鏈氨基上加入甲基。4、生物素化——用生物素附加物令保存的賴氨酸酰化。5、谷氨酸化——在谷氨酸與導(dǎo)管素及其他蛋白質(zhì)之間建立共價(jià)鍵。6、甘氨酸化——在一個(gè)至超過(guò)40種甘氨酸與導(dǎo)管素的C末端建立共價(jià)鍵。7、糖化——將糖基加入天冬酰胺、羥離氨酸、絲氨酸或蘇氨酸，形成糖蛋白。8、異戊二烯化——加入如法呢醇及四異戊二烯等異戊二烯。9、硫辛酸化——附著硫辛酸的功能性。四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域