南京外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)分析

全長轉(zhuǎn)錄組測序的優(yōu)勢：1、全方面鑒定可變剪切；2、發(fā)現(xiàn)更多新基因；3、有效改善基因組注釋；4、鑒定更多的LncRNA；5、準(zhǔn)確定位融合基因。研究思路：由于全長轉(zhuǎn)錄組測序是基于第三代測序技術(shù)，因而其成本依然較高，如果全部研究項(xiàng)目均基于全長轉(zhuǎn)錄組，通常來說很難承擔(dān)，因此，全長轉(zhuǎn)錄組測序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測序相結(jié)合。宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)是什么？宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)也稱為環(huán)境轉(zhuǎn)錄組學(xué)，指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時(shí)期菌群群體全部基因轉(zhuǎn)錄情況以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律，以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機(jī)制，探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機(jī)理。轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。南京外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)分析

什么叫轉(zhuǎn)錄組學(xué)？廣義轉(zhuǎn)錄組是指生命單元(通常是一種細(xì)胞)中所有按基因信息單元轉(zhuǎn)錄和加工的RNA分子(包括編碼和非編碼RNA功能單元),或者是一個(gè)特定細(xì)胞所有轉(zhuǎn)錄本的總和.它的研究對象就是這些RNA與蛋白質(zhì)分子和它們所組成的基因功能網(wǎng)絡(luò)以及它們與細(xì)胞功能的關(guān)系.而狹義轉(zhuǎn)錄組是指可直接參與翻譯蛋白質(zhì)的mRNA總和。轉(zhuǎn)錄組是干什么用的，和表達(dá)譜有什么區(qū)別？轉(zhuǎn)錄組，指細(xì)胞某一時(shí)期所有基因的轉(zhuǎn)錄水平。轉(zhuǎn)錄組學(xué)，是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡而言之，轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。四川全轉(zhuǎn)錄學(xué)組分析鑒定轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進(jìn)行檢測。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的方法：在早期，由于測序價(jià)格昂貴、基因序列數(shù)目有限，轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究者只能進(jìn)行極少數(shù)特定基因的結(jié)構(gòu)功能分析和表達(dá)研究。近十幾年，分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展使高通量分析成為可能，這為真正意義上的轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究奠定了基礎(chǔ)。這些高通量研究方法主要可以分為兩類：一類是基于這類方法包括表達(dá)序列標(biāo)簽技術(shù)、基因表達(dá)系列分析技術(shù)、大規(guī)模平行測序技術(shù)、RNA測序技術(shù)其中，Microarray和EST技術(shù)是較早發(fā)展起來的先驅(qū)技術(shù)，SAGE、MPSS和RNA-sea是高通量測序條件下的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究有助于了解特定生命過程中相關(guān)基因的整體表達(dá)情況，進(jìn)而從轉(zhuǎn)錄水平初步揭示該生命過程的代謝網(wǎng)絡(luò)及其調(diào)控機(jī)理。

轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）：轉(zhuǎn)錄組即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）主要通過高通量測序研究特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來的mRNA的表達(dá)量，進(jìn)而對相關(guān)基因和表型的關(guān)系進(jìn)行分析。本質(zhì)上講RNA-seq就是在用一種新的方法實(shí)現(xiàn)“基因決定性狀”的經(jīng)典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達(dá)分析的主要技術(shù)是基因芯片，不過由于高通量測序成本的下降，RNA-seq的運(yùn)用愈來愈普遍。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于植物生長機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測試步驟：第1步就是把單個(gè)細(xì)胞分選出來。分選的方式也比較多，物理切割，酶消化，F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個(gè)單細(xì)胞，跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來去建庫測序。但是一個(gè)細(xì)胞里的RNA含量是比較少的，難建庫成功。這個(gè)里面“量”的概念很有意思。比如說單細(xì)胞量少，需要特殊處理。因?yàn)閱渭?xì)胞里面RNA的量少，所以說整個(gè)富集的過程中會出現(xiàn)一部分基因在一個(gè)細(xì)胞里能檢測到，在另外一個(gè)細(xì)胞里面檢測不到，而每個(gè)細(xì)胞里面的檢測存在一個(gè)隨機(jī)性，同時(shí)單細(xì)胞測序深度比較低，所以說分析時(shí)相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意，但整體的分析思路是類似的。轉(zhuǎn)錄組學(xué)能夠檢測未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本。浙江高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析方法

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序樣品純度要求，電泳檢測28S:18S至少大于1.8。南京外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)分析

宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組概念：宏轉(zhuǎn)錄組測序是對某一特定時(shí)期、特定環(huán)境樣品中的全部微生物的RNA進(jìn)行高通量測序，直接獲得該環(huán)境中所有微生物轉(zhuǎn)錄組信息的一種測序技術(shù)的新應(yīng)用。宏轉(zhuǎn)錄組中不只包含有微生物的物種信息，還有微生物的基因表達(dá)信息。如果說宏基因組能告訴我們微生物群，那么宏轉(zhuǎn)錄組則能告訴我們這些微生物，這有助于挖掘微生物功能基因和探索微生物與環(huán)境、疾病、動植物等關(guān)系的機(jī)制。宏轉(zhuǎn)錄組分析：從以G為單位的高通量測序數(shù)據(jù)中獲取研究所需的微生物種類、基因、通路等信息是進(jìn)行宏轉(zhuǎn)錄組研究必須經(jīng)歷的一步?，F(xiàn)在網(wǎng)絡(luò)上分析組學(xué)數(shù)據(jù)的工具五花八門。能否從眾多組學(xué)工具中選擇出適合分析宏轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的軟件，能否搭建一套完整、快速、高效、靈敏、高精確的宏轉(zhuǎn)錄組分析pipline，直接關(guān)乎到后期數(shù)據(jù)分析的進(jìn)行。南京外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)分析