哈爾濱動(dòng)物靶向代謝組學(xué)分析

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-28

代謝組學(xué)的特點(diǎn):1.相對(duì)于其他組學(xué)研究,檢測(cè)技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單(液-質(zhì)聯(lián)用,氣-質(zhì)聯(lián)用及核磁)2.代謝組學(xué)是體內(nèi)外多種綜合因素的結(jié)果。代謝組學(xué)的應(yīng)用:生物標(biāo)志物尋找,療效的監(jiān)控,疾病分型,中藥研究中的治病機(jī)理,毒副作用評(píng)價(jià)。代謝組學(xué)研究思路:1.?通過(guò)差異分析得到差異代謝物后,對(duì)大樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行KM,ROC,Cox等分析,發(fā)現(xiàn)臨床生存及疾病預(yù)測(cè)價(jià)值。2.?差異代謝物進(jìn)行功能研究,抗代謝物或者是添加外源代謝物,細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該代謝物對(duì)表型的重要性。3.?多組學(xué)研究,根據(jù)代謝物找到上游調(diào)控蛋白,對(duì)上游蛋白進(jìn)行研究。代謝組學(xué)的概念來(lái)源于代謝組,代謝組是指某一生物或細(xì)胞在一特定生理時(shí)期內(nèi)所有的低分子量代謝產(chǎn)物。哈爾濱動(dòng)物靶向代謝組學(xué)分析

非靶向代謝組學(xué):非靶向代謝組學(xué)是將生物體所有內(nèi)源性代謝物作為研究目標(biāo)(廣篩),重點(diǎn)在于比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,發(fā)現(xiàn)尋找其種具有明顯的變化的代謝物質(zhì)(差異代謝物),并構(gòu)建代謝通路以解釋代謝物于該生命體的關(guān)聯(lián)。LC-MS非靶向代謝組的優(yōu)勢(shì):1、分析范圍廣,MS幾乎可以檢測(cè)所有的化合物,更加容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題;2、分離能力強(qiáng),即使被分析混合物在色譜上沒(méi)有完全分離開(kāi),但通過(guò)MS的特征離子質(zhì)量色譜圖也能分別給出它們各自的色譜圖來(lái)進(jìn)行定性定量。濟(jì)南LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容與基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)相比,代謝組學(xué)與生理學(xué)的聯(lián)系更加緊密。

代謝組學(xué)需要多少的生物學(xué)重復(fù)?生物學(xué)重復(fù)指的是相同處理的相同類型的生物樣本的數(shù)量(如相同劑量給藥后2小時(shí)的小鼠采集并且相同儲(chǔ)存條件和處理方法血清樣本)。相較于基因和蛋白,代謝物處于生命活動(dòng)的下游,收到環(huán)境和遺傳背景等因素影響較大,生物學(xué)重復(fù)少可能會(huì)放大組內(nèi)差異對(duì)于整體差異的影響,進(jìn)而影響結(jié)果(如準(zhǔn)確和足夠多的找出生物標(biāo)志物)。因此根據(jù)不同的生物類型,需要不同的生物學(xué)重復(fù)來(lái)增加數(shù)據(jù)的可靠性和說(shuō)服力。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似。

代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復(fù)凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個(gè)樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請(qǐng)全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中,8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存,-80度凍存;單個(gè)樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請(qǐng)咨詢譜領(lǐng)工作人員。代謝組學(xué)可與生物表型變化建立直接相關(guān)性。

非靶向代謝組學(xué):新陳代謝網(wǎng)絡(luò)是復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),特別是人體的代謝網(wǎng)絡(luò),一直被認(rèn)為是相對(duì)復(fù)雜的代謝網(wǎng)絡(luò)?,F(xiàn)在多數(shù)信號(hào)通路的研究是集中在代謝網(wǎng)絡(luò)的一個(gè)很小的領(lǐng)域?;蚪M學(xué)、蛋白組學(xué)研究已經(jīng)揭示了部分調(diào)節(jié)通路,但是和代謝網(wǎng)絡(luò)直接相關(guān)的是代謝產(chǎn)物。從多種代謝產(chǎn)物中選取研究對(duì)象,無(wú)疑是困難的。非靶向代謝組學(xué)又稱為發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué),主要是將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的代謝組(某一生物體的全部代謝物)進(jìn)行比對(duì),以找出其代謝物的差異。代謝組學(xué)研究通過(guò)一定的手段能夠幫助研究員從代謝產(chǎn)物海中跳出來(lái),提供一個(gè)“航拍”的視角,從而發(fā)現(xiàn)差異性代謝產(chǎn)物。然后通過(guò)已知的代謝通路逆推找出調(diào)節(jié)酶和基因,完成疾病發(fā)病機(jī)制、藥物療理機(jī)制等方面的研究。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似。哈爾濱動(dòng)物靶向代謝組學(xué)分析

代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)重要的分支,與其他組學(xué)相比有著其特有的優(yōu)勢(shì)。哈爾濱動(dòng)物靶向代謝組學(xué)分析

靶向代謝組學(xué)分析成功的關(guān)鍵因素是準(zhǔn)確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學(xué)鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測(cè) (SIM),或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè) (MRM) 進(jìn)行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度,在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強(qiáng)的原因是延長(zhǎng)了所選擇離子的采集時(shí)間。因?yàn)楸O(jiān)測(cè)的是一個(gè)很小的質(zhì)量窗口,所以質(zhì)量色譜圖只表示對(duì)極為特定質(zhì)量的檢測(cè)。在大多數(shù)情況下,靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進(jìn)行質(zhì)譜定量的選擇方法,與 SIM 相比更為靈敏、更加特異??梢援a(chǎn)生獨(dú)特的碎片離子,可對(duì)非常復(fù)雜基質(zhì)中的目標(biāo)化合物進(jìn)行監(jiān)測(cè)和定量。哈爾濱動(dòng)物靶向代謝組學(xué)分析