廣東丙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)有哪些類(lèi)型

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-21

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點(diǎn)?廣東丙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)有哪些類(lèi)型

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的介紹:泛素由76個(gè)氨基酸組成,高度保守,普遍存在于真核細(xì)胞內(nèi),故名泛素。泛素化是可逆的,依賴(lài)ATP并且通過(guò)泛素刺激酶E1,泛素結(jié)合酶E2,泛素連接酶E3一系列催化反應(yīng)所致。這些特殊的酶包括泛素酶,結(jié)合酶、連結(jié)酶和降解酶等。泛素化在蛋白質(zhì)的定位、代謝、功能、調(diào)節(jié)和降解中都起著十分重要的作用。同時(shí),它也參與了細(xì)胞周期、增殖、凋亡、分化、轉(zhuǎn)移、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號(hào)傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控。泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來(lái)生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,它已然成為研究、開(kāi)發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。哈爾濱蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)價(jià)格蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位。

乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向:1、乙酰化修飾與細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過(guò)程研究。2、乙酰化引起的代謝疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機(jī)理研究。乙?;飳W(xué)意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個(gè)研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,育種保護(hù)研究等;2、 畜牧業(yè):肉類(lèi)及乳品質(zhì)研究,致病機(jī)理研究等。

甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:目前用于甲基化蛋白質(zhì)組分析的甲基化肽段富集抗體分為精氨酸甲基化(Me-R)抗體和賴(lài)氨酸甲基化(Me-K)抗體兩大類(lèi)。根據(jù)氨基酸殘基上所含甲基化修飾基團(tuán)數(shù)量的不同,精氨酸甲基化(Me-R)抗體又包括:?jiǎn)渭谆彼幔∕MA)抗體、非對(duì)稱(chēng)二甲基化精氨酸(ADMA)抗體和對(duì)稱(chēng)二甲基化精氨酸(SDMA)抗體;賴(lài)氨酸甲基化(Me-K)抗體又包括:賴(lài)氨酸單甲基化(K-Me)抗體、賴(lài)氨酸二甲基化(K-2Me)抗體和賴(lài)氨酸三甲基化(K-3Me)抗體。其中,Me-R的各類(lèi)抗體需要單獨(dú)使用,而Me-K抗體可以混合使用。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:盡管質(zhì)譜儀器的分析能力近年來(lái)有了長(zhǎng)足的發(fā)展,但是由于蛋白翻譯后修飾化學(xué)計(jì)量值低、復(fù)雜性大,直接將蛋白組(如全細(xì)胞裂解產(chǎn)物,組織勻漿產(chǎn)物或全血清蛋白)的酶解肽段送入質(zhì)譜鑒定和定量PTM是非常困難的。因此,很多翻譯后修飾的富集方法會(huì)被采用,來(lái)提高樣品中PTM肽段的豐度和相對(duì)比例,從而提高了質(zhì)譜對(duì)翻譯后修飾位點(diǎn)的鑒定效率。研究發(fā)現(xiàn)在泛素化修飾的蛋白在tyrpsin的作用下都會(huì)產(chǎn)生diGly位點(diǎn)?;谶@一特異性,利用針對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)基序(motif)抗體,在肽段水平上免疫親和富集帶有泛素化修飾的肽段,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進(jìn)行定量分析,能夠快速、準(zhǔn)確、高通量地分析多種疾病相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)蛋白修飾的變化,滿(mǎn)足創(chuàng)新性研究、生物標(biāo)志物鑒定、藥物靶點(diǎn)篩選和評(píng)價(jià)的需求。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)的特征,雖然具有挑戰(zhàn)性,但提供了對(duì)病因?qū)W過(guò)程下的細(xì)胞功能的無(wú)價(jià)的洞察。廣東丙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些類(lèi)型

在有機(jī)體內(nèi),磷酸化是蛋白翻譯后修飾中比較普遍的共價(jià)修飾形式。廣東丙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)有哪些類(lèi)型

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過(guò)高質(zhì)量的修飾類(lèi)抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,通過(guò)相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,并通過(guò)軟件完成數(shù)據(jù)檢索。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。廣東丙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些類(lèi)型