上海常規(guī)蛋白質組學分析方法

來源: 發(fā)布時間:2022-04-06

定量蛋白質組學技術:定量蛋白質組學是蛋白質組研究的重要內容,通過對基因表達產物——蛋白質的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達情況。近年來,隨著非凝膠技術的發(fā)展,蛋白質組學(“Shotgun”proteomics)技術,特別是多維蛋白質鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質表達和定性和定量分析的強有力工具。蛋白質組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質組學是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(label free)定量策略。上海常規(guī)蛋白質組學分析方法

蛋白組學樣本要求:常規(guī)組織:(心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等)PBS洗滌去除殘留血液和污染物,剔除無關的干擾組織(血管、脂肪、結締組織等);沖洗干凈,用組織剪或手術刀將組織分離成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟骨組織:PBS洗滌去除殘留血液和污染物;用手術刀將軟骨切成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟體動物(吸蟲等)PBS洗滌去除來自宿主的污染;液氮速凍5min,保存于-80℃。蛋白質組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據和解決途徑。上海常規(guī)蛋白質組學分析方法蛋白質組的概念與基因組的概念有許多差別。

Labelfree非標記定量蛋白質組學技術特點:(1)不需要標記處理,操作簡單,成本低、實驗周期短;(2)每個樣品單獨處理、上機;(3)可以做任意樣本的總蛋白質差異定量,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,對于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒有問題,但是定量的準確性較標記定量稍差,會受到質譜穩(wěn)定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本)。蛋白質組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。

蛋白質組學,指對某一基因組所表達的所有蛋白質及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網絡。研究的內容主要包括:組成蛋白質一級結構氨基酸的序列特征、蛋白質的豐度、蛋白質活性、蛋白質的修飾、亞細胞定位和三維結構、蛋白質之間的相互作用以及對蛋白質的高階復合物結構。質譜技術的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術支撐,使得許多有實際應用的蛋白質組功能研究成為可能,包括翻譯后修飾的整體分析,蛋白質相互作用網絡的重建和模式生物蛋白表達譜的定量研究;在臨床醫(yī)學和轉化醫(yī)學研究中也越來越多地應用到蛋白質組學技術。蛋白質組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質的常規(guī)、可靠、有效的技術。

定量蛋白質組學技術:TMT定量蛋白組學技術:TMT(TandemMassTags)定量蛋白質組學技術多肽體外標記定量技術。這種技術采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標簽,特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質譜分析,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學技術是多肽體外標記定量技術。這種技術同TMT定量蛋白組學技術相似,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。蛋白質組學是以蛋白質組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質組成及其變化規(guī)律的科學。南京定量N糖基化蛋白質組學檢測價格

蛋白質組學技術的發(fā)展已經成為現(xiàn)代的生物技術快速發(fā)展的重要支撐。上海常規(guī)蛋白質組學分析方法

蛋白質組學發(fā)展趨勢:1、基礎研究方面:近兩年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域,如細胞生物學、神經生物學等。在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等等。在未來的發(fā)展中,蛋白質組學的研究領域將更加普遍。2、應用研究方面:蛋白質組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質組技術也有十分誘人的前景,目前國際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進行蛋白質組學方面的應用性研究。上海常規(guī)蛋白質組學分析方法