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翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化。深圳蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)方法
蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義?在哺乳動(dòng)物細(xì)胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過(guò)磷酸化修飾,在脊椎動(dòng)物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過(guò)程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過(guò)激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號(hào)通路進(jìn)而參與調(diào)控生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育、逆境應(yīng)激、疾病發(fā)生等多種生命過(guò)程,一直是生物學(xué)研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)(P04)轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過(guò)程。四川丙二酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括乙?;?。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測(cè)方法:質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一,可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),如磷酸化、乙酰化、泛素化、SUMO化、糖基化等,大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性。檢測(cè)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對(duì)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個(gè)富集步驟,因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測(cè)方法都是結(jié)合富集策略開(kāi)發(fā)的,以比較好的識(shí)別、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過(guò)可逆的共價(jià)鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合,調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生。通過(guò)實(shí)驗(yàn)的方法鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾的位點(diǎn)需要耗費(fèi)大量的資金和時(shí)間,并且酶反應(yīng)的優(yōu)化常常難以實(shí)現(xiàn)。而計(jì)算的方法則能夠快速、準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)酶特異性的底物蛋白質(zhì)及其修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾?
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見(jiàn)的。蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾反應(yīng)是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,通過(guò)基于其氨基酸殘基的化學(xué)反應(yīng)獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團(tuán)或新官能團(tuán)的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴(kuò)展20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的化學(xué)組成。翻譯后修飾的位點(diǎn)通常帶有可以在化學(xué)反應(yīng)中充當(dāng)親核試劑的官能團(tuán),如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時(shí),在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點(diǎn)。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點(diǎn)的一些亞甲基上。乙?;揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。南京蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)一般流程
蛋白質(zhì)的翻譯后修飾調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。深圳蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)方法
翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學(xué)水平上對(duì)存在翻譯后修飾的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細(xì)胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個(gè)共價(jià)加工過(guò)程。蛋白翻譯后修飾通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基上加修飾基團(tuán)或通過(guò)蛋白質(zhì)水解去基團(tuán)而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能。經(jīng)過(guò)翻譯后修飾的蛋白質(zhì)稱為翻譯后修飾蛋白。目前,已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙?;⒎核鼗?、二硫鍵配對(duì)、甲基化和亞硝基化等等。深圳蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)方法
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