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普通轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序適用于哪些情況?普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要適用于兩大類:一是不同的生長(zhǎng)階段或者發(fā)育過(guò)程;二是不同的環(huán)境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序必須做生物學(xué)重復(fù)么?需要幾個(gè)重復(fù)?生物學(xué)重復(fù)是生物實(shí)驗(yàn)所必須的,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序也不例外,至少3次生物學(xué)重復(fù)。準(zhǔn)備生物重復(fù)樣品時(shí),通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)的預(yù)先設(shè)計(jì)和控制,盡可能將與實(shí)驗(yàn)處理無(wú)關(guān)的背景條件控制在同一水平,減少批次效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序可以同時(shí)測(cè)到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?我們通常所講的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序只能測(cè)到mRNA。但是全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序通過(guò)構(gòu)建兩個(gè)測(cè)序文庫(kù)(一是小RNA測(cè)序文庫(kù)、二是lncRNA測(cè)序文庫(kù))是可以測(cè)到以上4種RNA的。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于基因點(diǎn)突變及多態(tài)性檢測(cè)。浙江SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序類型:1.根據(jù)RNA種類:可以分為mRNA測(cè)序,SmallRNA測(cè)序,LncRNA測(cè)序、CircRNA測(cè)序、全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等。2.根據(jù)物種特點(diǎn):比如真核生物或者原核生物,是否有參考基因組,測(cè)序平臺(tái)的不同,分為真核有參和無(wú)參轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,原核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等。3.根據(jù)相互關(guān)系:分為互作轉(zhuǎn)錄組,比較轉(zhuǎn)錄組等等;此外,基因組甲基化會(huì)影響到基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,也屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)控測(cè)序范疇;還有用于研究轉(zhuǎn)錄因子與DNA的交互作用或組蛋白修飾在基因組上的分布的ChIP-Seq,研究RNA與蛋白互作關(guān)系的RIP-Seq,以及研究RNA甲基化的MeRIP-Seq等。武漢單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本片段序列。
circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué):是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,沒(méi)有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly(A)結(jié)構(gòu),主要位于細(xì)胞質(zhì)或儲(chǔ)存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達(dá)更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時(shí)由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)的催化關(guān)鍵,然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來(lái)源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA,內(nèi)含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。
轉(zhuǎn)錄組是干什么用的,和表達(dá)譜有什么區(qū)別?轉(zhuǎn)錄組,指細(xì)胞某一時(shí)期所有基因的轉(zhuǎn)錄水平。轉(zhuǎn)錄組學(xué),是一門(mén)在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡(jiǎn)而言之,轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。對(duì)RNA的分析。分析應(yīng)該是分幾個(gè)維度的DNA到RNA,RNA的剪切拼接,RNA的翻譯。表達(dá)譜有兩種,分別是基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)表達(dá)譜?;虮磉_(dá)譜是指細(xì)胞中所有基因表達(dá)的格局。通過(guò)比較分析基因表達(dá)譜,可從整體水平研究代謝機(jī)制,認(rèn)識(shí)基因相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系,發(fā)現(xiàn)重要基因。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于植物生長(zhǎng)機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)的應(yīng)用:RNA-Seq即對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序和分析。一般來(lái)說(shuō)在研究所會(huì)委托公司測(cè)序得到數(shù)據(jù)自己進(jìn)行后續(xù)的生信分析(質(zhì)控,mapping,差異基因表達(dá)分析,SNV分析等)。RNA-Seq有著巨大的應(yīng)用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種,不同組織:研究基因在不同部分的表達(dá)情況。同一物種,同一組織:研究基因在不同處理下,不同條件下的表達(dá)變化。同一組織,不同物種:研究基因的進(jìn)化關(guān)系。時(shí)間序列實(shí)驗(yàn):基因在不同時(shí)期的表達(dá)情況與發(fā)育的關(guān)系。基因分類:找到細(xì)胞特異,疾病相關(guān),處理相關(guān)的基因表達(dá)模式,用于診斷疾病和預(yù)測(cè)等?;蚓W(wǎng)絡(luò)和通路:基因在細(xì)胞活動(dòng)中的功能,基因間的相互作用。轉(zhuǎn)錄組學(xué)無(wú)需了解物種基因信息,能夠直接對(duì)任何物種進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析。武漢RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于表達(dá)差異的研究。浙江SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟:?jiǎn)渭?xì)胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細(xì)胞。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴(kuò)增:RNA測(cè)序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-**NA測(cè)序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細(xì)胞;顯微操作分選單細(xì)胞;流式分選帶有表面Marker的單細(xì)胞;激光切割實(shí)體組織;微流控技術(shù);磁珠捕獲,主要用于CTC。它的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以結(jié)合流式細(xì)胞熒光分選(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根據(jù)表面Marker分選細(xì)胞。因此特別適合分選細(xì)胞子集用于測(cè)序。它的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以獲得細(xì)胞形態(tài)全覽圖,提供另外一個(gè)維度的信息,可用于鑒定微孔中是否有損傷的細(xì)胞或雙份細(xì)胞,主要缺點(diǎn)是通量低且每個(gè)細(xì)胞所需的工作量相當(dāng)大。浙江SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域
上海拜譜生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),是一家服務(wù)型的公司。公司自成立以來(lái),以質(zhì)量為發(fā)展,讓匠心彌散在每個(gè)細(xì)節(jié),公司旗下多組學(xué)服務(wù),質(zhì)譜檢測(cè),蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué)深受客戶的喜愛(ài)。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí),遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務(wù)服務(wù)行業(yè)的發(fā)展。拜譜生物憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來(lái)的聲譽(yù)和口碑,讓企業(yè)發(fā)展再上新高。